[PDF] GB 5009.290-2023 - 中国标准 英文版
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| GB 5009.290-2023 | 140 | GB 5009.290-2023 | 9秒内发货PDF | 食品安全国家标准 食品中维生素K2的测定 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | GB 5009.290-2023 (GB5009.290-2023) |
| 中文名称 | 食品安全国家标准 食品中维生素D的测定 |
| 英文名称 | National food safety standard - Determination of Vitamin K2 in foods |
| 行业 | 国家标准 |
| 中标分类 | X09 |
| 字数估计 | 7,789 |
| 发布日期 | 2023-09-06 |
| 实施日期 | 2024-03-06 |
| 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 |
| 范围 | 本标准规定了食品中四烯甲萘醌、七烯甲萘醌、九烯甲萘醌含量的液相色谱测定方法。本标准适用于乳及乳制品、特殊膳食用食品、发酵豆制品和肉及肉制品中四烯甲萘醌、七烯甲萘醌、九烯甲萘醌三种维生素K2分型的测定。 |
GB 5009.290-2023 中文版: 食品安全国家标准 食品中维生素K2的测定
GB 5009.290-2023 英文版: (National Food Safety Standard Determination of Vitamin K2 in Food)
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
食品安全国家标准
食品中维生素K2的测定
2023-09-06发布
2024-03-06实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
食品安全国家标准
食品中维生素K2的测定
1 范围
本标准规定了食品中四烯甲萘醌、七烯甲萘醌、九烯甲萘醌含量的液相色谱测定方法。
本标准适用于乳及乳制品、特殊膳食用食品、发酵豆制品和肉及肉制品中四烯甲萘醌、七烯甲萘醌、
九烯甲萘醌三种维生素K2 分型的测定。
2 原理
试样经脂肪酶、淀粉酶或蛋白酶酶解,采用正己烷提取四烯甲萘醌、七烯甲萘醌、九烯甲萘醌,提取
液浓缩后经反相液相色谱分离,锌还原柱柱后衍生,荧光检测器检测,外标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。
3.1.2 无水乙醇(C2H6O)。
3.1.3 正己烷(C6H14)。
3.1.4 碳酸钾(K2CO3)。
3.1.5 二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯。
3.1.6 四氢呋喃(C4H8O):色谱纯。
3.1.7 冰乙酸(C2H4O2)。
3.1.8 氯化锌(ZnCl2)。
3.1.9 无水乙酸钠(C2H3O2Na)。
3.1.10 磷酸二氢钾(KH2PO4)。
3.1.11 淀粉酶:(CAS号:9000-92-4)酶活力≥4000U/g。
3.1.12 脂肪酶:(CAS号:9001-62-1)酶活力≥40U/g。
3.1.13 蛋白酶:(CAS号:9001-73-4)酶活力≥6000U/mg。
3.1.14 氢氧化钾(KOH)。
3.2 试剂配制
3.2.1 400g/L氢氧化钾溶液:称取20.0g氢氧化钾于100mL烧杯中,用20mL水溶解,冷却后,转移
至50mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀,储存于聚乙烯瓶中。
3.2.2 磷酸盐缓冲溶液(pH8.0):称取54.0g磷酸二氢钾于500mL烧杯中,用300mL水溶解,用
400g/L氢氧化钾溶液(3.2.1)调节pH至8.0±0.2,转移至500mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀。
3.2.3 流动相:称取1.5g氯化锌、0.5g无水乙酸钠于1000mL烧杯中,加入500mL甲醇、100mL二
氯甲烷(或四氢呋喃)、0.3mL冰醋酸,转移至1000mL容量瓶中,超声溶解后,加甲醇定容至刻度,混
匀,用0.22μm滤膜过滤。
注:增加二氯甲烷,可以缩短保留时间,最高不宜超过150mL/L。
3.2.4 二氯甲烷甲醇溶液(体积比10+90):准确吸取二氯甲烷20mL于200mL容量瓶中,用甲醇稀
释并定容至刻度,混匀。
3.3 标准品
3.3.1 四烯甲萘醌(MK-4)标准品(C31H40O2,CAS号:863-61-6):纯度≥98%,或经国家认证并授予标
准物质证书的标准物质。
3.3.2 七烯甲萘醌(MK-7)标准品(C46H64O2,CAS号:2124-57-4):纯度≥98%,或经国家认证并授予
标准物质证书的标准物质。
3.3.3 九烯甲萘醌(MK-9)标准品(C56H80O2,CAS号:523-39-7):纯度≥98%,或经国家认证并授予标
准物质证书的标准物质。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 标准储备溶液
3.4.1.1 MK-4标准储备溶液(1.0mg/mL):准确称取 MK-4标准品25mg(精确至0.1mg),用二氯甲
烷甲醇溶液(3.2.4)溶解并定容至25mL,混匀。将溶液储存于棕色玻璃容器中,-20℃±2℃避光保
存,保存期限为6个月。
3.4.1.2 MK-7标准储备溶液(1.0mg/mL):准确称取 MK-7标准品25mg(精确至0.1mg),用二氯甲
烷甲醇溶液(3.2.4)溶解并定容至25mL,混匀。将溶液储存于棕色玻璃容器中,-20℃±2℃避光保
存,保存期限为6个月。
3.4.1.3 MK-9标准储备溶液(0.5mg/mL):准确称取 MK-9标准品25mg(精确至0.1mg),用二氯甲
烷甲醇溶液(3.2.4)溶解并定容至50mL,混匀。将溶液储存于棕色玻璃容器中,-20℃±2℃避光保
存,保存期限为6个月。
3.4.2 标准中间溶液
3.4.2.1 MK-4和 MK-7混合标准中间溶液(10μg/mL):分别准确吸取 MK-4、MK-7标准储备溶液
0.50mL于50mL容量瓶中,用二氯甲烷甲醇溶液(3.2.4)稀释并定容至刻度,混匀。将溶液储存于棕
色玻璃容器中,-20℃±2℃避光保存,保存期限为6个月。
3.4.2.2 MK-9标准中间溶液(50μg/mL):准确吸取 MK-9标准储备溶液5.00mL于50mL容量瓶中,
用二氯甲烷甲醇溶液(3.2.4)稀释并定容至刻度,混匀。将溶液储存于棕色玻璃容器中,-20℃±2℃避光
保存,保存期限为6个月。
3.4.3 标准工作溶液
分别准确吸取 MK-4、MK-7混合标准中间溶液0.025mL、0.050mL、0.10mL、0.30mL、0.50mL、
1.0mL于10mL容量瓶中,准确吸取 MK-9标准中间溶液0.010mL、0.020mL、0.040mL、0.060mL、
0.10mL、0.20mL于上述10mL容量瓶中,用流动相(3.2.3)定容至刻度,混匀。得到 MK-4、MK-7标
准工作溶液质量浓度分别为0.025μg/mL、0.050μg/mL、0.10μg/mL、0.30μg/mL、0.50μg/mL、
1.0μg/mL,MK-9标准工作溶液质量浓度分别为0.050μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.30μg/mL、
0.50μg/mL、1.0μg/mL。临用现配。
注:MK-7、MK-9低温高浓度时易过饱和,出现浑浊,可提高溶解温度至40℃±2℃超声,至完全溶解,恢复室温使
用;所称取的标准品质量是折合纯标准品的质量。
3.5 材料
一次性微孔滤膜:0.22μm,有机相。
4 仪器和设备
4.1 液相色谱仪:配有荧光检测器。
4.2 电子天平:感量分别为0.1g、1mg和0.01mg。
4.3 水平振荡器。
4.4 涡旋混合器。
4.5 高速离心机(转速≥6000r/min)。
4.6 恒温水浴锅。
4.7 旋转蒸发仪。
4.8 氮气浓缩装置。
4.9 pH计:精确至0.1。
4.10 组织粉碎机。
4.11 均浆器。
4.12 超声波清洗器。
5 分析步骤
5.1 试样制备
质地均匀的粉末类样品测定前充分混匀;肉与肉制品取可食部分粉碎均质;其他固体、半固体样品
粉碎均质。液态样品测定前混匀。
注:处理过程尽可能避光操作,制备成均匀试样后,避光尽快检测。
5.2 试样处理
警示:处理过程应避免紫外光直接照射,尽可能避光操作。
5.2.1 酶解
5.2.1.1 乳及乳制品和特殊膳食用食品
称取混匀后的粉末试样50g(精确至0.1g)(m1)至250mL烧杯中,加入100mL水,记录加水后的
溶液质量(m2),充分混匀溶解;准确称取制备后的溶液6g(精确至0.001g)(m3)于50mL离心管中,
加入水11mL,再加入磷酸盐缓冲液(3.2.2)5mL,混匀,于50℃±2℃水浴超声15min,冷却至室温
后,加入脂肪酶0.5g,再加淀粉酶0.2g,加盖,涡旋2min~3min,混匀后,置于37℃±2℃恒温水浴锅
中酶解2h以上(每30min涡旋1min),使其充分酶解。
液体样品,称取混匀样品1g~10g(精确至0.001g)(ms)于50mL离心管中,加水至15mL;提取
液加入磷酸盐缓冲液(3.2.2)5mL,混匀,于50℃±2℃水浴超声15min,冷却至室温后,加入脂肪酶
0.5g,再加淀粉酶0.2g,加盖,涡旋2min~3min,混匀后,置于37℃±2℃恒温水浴锅中酶解2h以
上(每30min涡旋1min),使其充分酶解。
5.2.1.2 发酵豆制品
称取均质后的试样50g(精确至0.1g)(m1)至250mL烧杯中,加入100mL水,记录加水后的溶液
质量(m2),匀浆器匀浆后,立即准确称取匀浆试样3g(精确至0.001g)(m3)于50mL离心管中,加入
水13mL,加入磷酸盐缓冲液(3.2.2)5mL,混匀,于50℃±2℃水浴超声15min,冷却至室温后,加入
脂肪酶0.2g,加入蛋白酶0.1g,加盖,涡旋2min~3min,混匀后,置于37℃±2℃恒温水浴锅中酶解
4h以上(每30min涡旋1min),使其充分酶解。
5.2.1.3 肉及肉制品
称取均质后的试样50g(精确至0.1g)(m1)至250mL烧杯中,加入100mL水,记录加水后的溶液
质量(m2),匀浆器匀浆后,立即准确称取匀浆试样15g(精确至0.001g)(m3)于50mL离心管中,加入
水5mL,加入磷酸盐缓冲液(3.2.2)5mL,混匀,于50℃±2℃水浴超声15min,冷却至室温后,加入脂
肪酶0.2g,加入蛋白酶0.1g,加盖,涡旋2min~3min,混匀后,置于37℃±2℃恒温水浴锅中酶解
4h以上(每30min涡旋1min),使其充分酶解。
5.2.2 提取
取出酶解好的试样,分别加入10mL无水乙醇及1.0g碳酸钾,混匀后加入10mL正己烷,3000r/min
涡旋2min~3min或≥250r/min振荡提取10min,以6000r/min离心5min,转移上清液至100mL
旋蒸瓶中。
注:为保证提取完全,必要时可向下层溶液中再加入10mL正己烷,重复操作1次,合并上清液至上述旋蒸瓶中。
5.2.3 浓缩
将上述正己烷提取液于40℃±2℃水浴旋蒸至干(如有残液,可用氮气轻吹至干),用5.0mL流动
相(3.2.3)充分溶解浓缩物,将此溶解液用0.22μm滤膜过滤,此滤液为制备的试样溶液。
注:浓缩氮吹后,如果样品浓缩物常温不易溶解,可提高溶解温度至40℃±2℃,至完全溶解。纳豆等 MK-7含量
高的样品,可适当加大(5.2.3)定容体积,使制备的试样溶液浓度在标准曲线范围内。
5.3 仪器参考条件
5.3.1 色谱柱:C18(5μm,4.6mm×150mm)或具有同等性能的色谱柱。
5.3.2 锌还原柱:4.6mm×50mm(填料:锌粉,锌粉平均粒径70μm。锌粉还原柱可直接购买商品柱,
此锌粉还原柱连接于色谱柱后)。
5.3.3 荧光检测器:激发波长为326nm,发射波长为410nm。
5.3.4 流动相:等度洗脱(按3.2.3配制)。
5.3.5 流速:0.8mL/min。
5.3.6 进样量:20μL。
5.3.7 标准溶液的色谱图见附录A中图A.1。
5.4 标准曲线的制作
分别将 MK-4、MK-7、MK-9标准系列溶液按照浓度由低到高的顺序注入液相色谱仪中,以测得的
峰面积为纵坐标,以 MK-4、MK......
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相关标准: GB 5009.292|GB 5009.300|GB 5009.299|GB 5009.288|GB 5009.290-2023|GB 5009.290|