| 标准编号 | GB/T 31805-2015 (GB/T31805-2015) | | 中文名称 | 豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Detection and identification of Cowpea severe mosaic virus | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 16,11 | | 发布日期 | 2015-07-03 | | 实施日期 | 2015-11-27 | | 标准依据 | 国家标准公告2015年第22号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | | 范围 | 本标准规定了豇豆重花叶病毒检疫鉴定的血清学、生物学和分子检测方法。本标准适用于可能携带有豇豆重花叶病毒的植物繁殖材料(种子、植株)和产品的检疫鉴定。 | GB/T 31805-2015
Detection and identification of Cowpea severe mosaic virus
ICS 65.020.01
B16
中华人民共和国国家标准
豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法
2015-07-03发布
2015-11-27实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布
机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检
疫局。
本标准主要起草人:陈青、李彬、方志鹏、黄峰、廖富荣、陈红运、林石明。
豇豆重花叶病毒检疫鉴定方法
1 范围
本标准规定了豇豆重花叶病毒检疫鉴定的血清学、生物学和分子检测方法。
本标准适用于可能携带有豇豆重花叶病毒的植物繁殖材料(种子、植株)和产品的检疫鉴定。
2 仪器设备和主要试剂
2.1 仪器设备
PCR仪、定量PCR仪、灭菌锅、制冰机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡震荡器、电泳仪、凝胶成像系
统、微量研磨仪、酶标仪、洗板机、微量天平(感量:0.001g)、水平电泳槽、高速冷冻台式离心机、水浴槽、
pH计、移液器(1000μL、200μL、20μL、2μL)、96孔酶标板、研钵等;防虫温室。
2.2 主要试剂
除另有规定外,所有试剂均为分析纯。PCR缓冲液、dNTPs(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、DNA
聚合酶、引物和探针、琼脂,酶联检测试剂见附录B。
3 检测样品的制备
3.1 种子
挑取畸形种子播于灭菌土中,待长出3片~4片叶后,将表现症状的植株编号,未表现症状的植株
分组(10株为1组)并编号。采集的叶片分成2份,根据需要分别用于酶联测定和分子检测。
3.2 植株
有症状(如叶片畸形、花叶、斑驳等)的植株编号单独检测。没有症状的分组并编号检测,分组方法
和检测方法同3.1。双抗体夹心酶联免疫吸附测定。
4 检测与鉴定
4.1 双抗体夹心酶联免疫吸附测定
把制备的样品上清液加入已包被CPSMV抗体的酶联板中,进行DAS-ELISA。每个样品平行加到
两个孔中。设阴性对照和阳性对照[健康的植物组织作阴性对照,感染了CPSMV的植物组织作阳性对
照,其中阴性对照种类和材料(如种子或叶片)应尽量与检测样品一致],样品提取缓冲液作空白对照,不
同的检测试剂或试剂盒按说明操作。具体操作见附录B。
4.2 RT-......
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