| 标准编号 | GB/T 31807-2015 (GB/T31807-2015) | | 中文名称 | 棉花根腐病菌检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Detection and identification of Phymatotrichopsis omnivora (Duggar) Hennebert | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 23,215 | | 发布日期 | 2015-07-03 | | 实施日期 | 2015-11-27 | | 标准依据 | 国家标准公告2015年第22号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 31807-2015
Detection and identification of Phymatotrichopsis omnivora(Duggar) Hennebert
ICS 65.020.01
B16
中华人民共和国国家标准
棉花根腐病菌检疫鉴定方法
2015-07-03发布
2015-11-27实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫
局、中国检验检疫科学研究院。
本标准主要起草人:张慧丽、张卫东、段维军、徐瑛、陈先锋、崔俊霞、杜洪忠、吴品珊。
棉花根腐病菌检疫鉴定方法
1 范围
本标准规定了棉花根腐病菌的检疫鉴定方法。
本标准适用于棉花根腐病寄主植物的植株、种子及介质的检疫鉴定。
2 仪器设备和主要试剂
2.1 仪器设备
显微镜、解剖镜、天平(感量1/100g,1/10000g)、pH 计、制冰机、纯水仪、涡旋振荡器、台式离心
机、高速冷冻离心机、低温冰箱、冷藏冷冻冰箱、超净工作台、PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像仪、
微量移液器(2μL、20μL、100μL、200μL、1000μL)。
2.2 主要试剂
除另有规定外,所有试剂均采用分析纯。包括无菌双蒸水、次氯酸钠、液氮、蛋白酶K、氯化镁、氢氧
化钠、醋酸铵、氯化钾、无水乙醇、溴化乙锭、三氯甲烷、异丙醇、异戊醇、TaqDNA聚合酶、dNTP混合
物、10×PCR 缓冲液、琼脂糖、DNA 相对分子质量标准物、CTAB、Tris/EDTA/SDS提取缓冲液
(TES)、Tris硼酸盐EDTA缓冲液(TBE)、Tris/EDTA缓冲液(TE)等。分离培养基、产孢培养基、马
铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)配制方法及步骤见附录C。
3 病菌的鉴定
3.1 症状检查
将可疑植株的根部在解剖镜下镜检,将带有菌丝索或菌核的病根挑出。种子类样品,从中挑选夹带
的植株残体,尤其是根部病残体。介质土借助湿筛挑出其中的菌核(参见附录B)。
3.2 病原菌的分离培养
3.2.1 病根上菌丝索的分离培养
在解剖镜下,将病根上覆盖的菌丝索挑下,用无菌水洗涤菌丝片段,洗净后置于分离培养基上,
28℃ 黑暗培养,每天观察,待长出菌丝后,挑取菌丝尖端转移到PDA平板上纯化。
3.2.2 病残体上病原菌的分离培养
在自来水下将病残体洗净,切取病健交界处组织,用1%次氯酸钠进行表面消毒3min,无菌水冲洗
3次,灭菌滤纸吸干表面水分后......
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