| 标准编号 | GB/T 36875-2018 (GB/T36875-2018) | | 中文名称 | 猪瘟病毒RT-nPCR检测方法 | | 英文名称 | Method of RT-nPCR for detection of classical swine fever virus | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 10,127 | | 发布日期 | 2018-09-17 | | 实施日期 | 2019-04-01 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 36875-2018
Method of RT-nPCR for detection of classical swine fever virus
ICS 11.220
B41
中华人民共和国国家标准
猪瘟病毒RT-nPCR检测方法
2018-09-17发布
2019-04-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中国国家标准化管理委员会 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由中华人民共和国农业农村部提出。
本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。
本标准起草单位:军事医学科学院军事兽医研究所、中国兽医药品监察所。
本标准主要起草人:郭焕成、王琴、徐璐、冯烨、张乾义、赵启祖、邹兴启、朱元源、涂长春。
猪瘟病毒RT-nPCR检测方法
1 范围
本标准规定了猪瘟病毒特异的反转录-套式聚合酶链反应(RT-nPCR)方法的技术要求。
本标准适用于可能感染猪瘟病毒的猪脏器、血液、粪便和细胞培养物中猪瘟病毒核酸的检测,可用
于猪瘟的诊断和监测。
本标准的猪瘟病毒RT-nPCR方法不能区分感染的猪瘟病毒野毒株和免疫的疫苗株。
2 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
RNA:核糖核酸(ribonucleicacid)
3 实验前准备
3.1 实验室条件
3.1.1 实验室分区
PCR实验室分区包括核酸提取区、PCR反应体系配制区---配液区、扩增区、电泳区。流程顺序为
核酸提取区→配液区→扩增区→电泳区。各区仪器和耗材专用。
3.1.2 实验室应配备的仪器及器材
3.1.2.1 仪器:Ⅱ级生物安全柜、台式高速冷冻离心机、普通冰箱(-20℃和4℃)、分析天平、PCR扩增
仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪(或紫外分析仪)、组织研磨器、扁桃体采样器、微波炉、单道可调移
液器(2μL、10μL、200μL、1000μL)。
3.1.2.2 器材:无菌注射器、眼科剪、眼科镊、称量纸、棉拭子、灭菌牙签、500mL量筒、500mL锥形瓶、
一次性无RNA酶吸头(10μL、200μL、1000μL)、1.5mL无RNA酶离心管、0.2mL薄壁PCR管。
3.2 化学药品及试剂
3.2.1 总RNA提取试剂Trizol。
3.2.2 TAE电泳缓冲液的制备,配制方法见附录A。
3.2.3 1%琼脂糖凝胶,配制方法见附录A。
3.2.4 其他试剂:200U/μLM-MLV反转录酶,5×M-MLV 缓冲液,40U/μLRNA酶抑制剂,DEPC-
H2O,5U/μLExTaqDNA聚合酶,10×ExTaq缓冲......
|