SN/T 5167-2019 相关标准英文版PDF
| 标准号码 | 价格美元 | 第2步(购买) | 交付天数 | 标准名称 |
| SN/T 5167-2019 | 420 | SN/T 5167-2019 | 3秒自动 | 出口动物源食品中氢氯噻嗪等10种利尿剂残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | SN/T 5167-2019 (SN/T5167-2019) |
| 中文名称 | 出口动物源食品中氢氯噻嗪等10种利尿剂残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 |
| 英文名称 | Determination of 10 diuretic residues including hydrochlorothiazide et al in animal--origin foodstuffs for export -- LC-MS / MS method |
| 行业 | 商检行业标准 (推荐) |
| 中标分类 | C53 |
| 国际标准分类 | 67.050 |
| 字数估计 | 8,819 |
| 发布日期 | 2019 |
| 实施日期 | 2020-05-01 |
| 发布机构 | 海关总署 |
SN/T 5167-2019
(Determination of residues of 10 diuretics such as hydrochlorothiazide in foods of animal origin for export.Liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry)
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
出口动物源食品中氢氯噻嗪等 10 种 利尿剂残留量的测定 液相色谱 - 质谱/质谱法
Determination of 10 diuretic residues including hydrochlorothiazide
2019-10-25 发布
2020-05-01 实施
中 华 人 民 共 和 国 海 关 总 署 发 布
ICS 67.050
C 53
前言
本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。
本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国武汉海关、湖北省食品质量安全监督检验研究院。
本标准主要起草人：赵晓亚、范志勇、叶诚、王鹏、尚吟竹、王晗、罗静、王振华、付晓芳、
李晶。
出口动物源食品中氢氯噻嗪等 10 种利尿剂残留量的测定
液相色谱 - 质谱/质谱法
1 范围
本标准规定了出口动物源食品中氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、丙磺舒、氯噻酮、乙酰唑胺、
呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮残留量的液相色谱 - 质谱/质谱的测定方法。
本标准适用于猪肉、牛肉、羊肉、牛奶和鸡蛋中氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、丙磺舒、氯噻
酮、乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮残留量的测定，其他食品也可参照使用。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 方法提要
试样经均质处理后，称取适量加入磷酸二氢钾，用乙腈提取，经分散固相萃取方法净化，液
相色谱 - 质谱/质谱仪测定，外标法定量。
4 试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
4.1 甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）。
4.2 甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1）：色谱纯。
4.3 乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。
4.4 磷酸二氢钾（KH2PO4，CAS 号：7778-77-0）。
4.5 无水硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9）。
4.6 0.1% 甲酸甲醇溶液：准确移取 1.0 mL 甲酸（4.1），用甲醇（4.2）定容至 1 000 mL。
4.7 水 -0.1% 甲酸甲醇溶液（70 ： 30，v/v）：移取 30 mL 0.1% 甲酸甲醇溶液（4.6）和 70 mL 水，混匀。
4.8 标准物质：坎利酮、螺内酯、氢氯噻嗪、氯噻嗪、乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、丙磺舒、氨苯
喋啶和氯噻酮标准物质的纯度均≥ 98%，标准物质的化合物信息参见附录 A。
4.9 标准储备液：称取适量标准物质（4.8）（精确至 0.000 01 g），分别用甲醇（4.2）溶解，配制成
浓度为 0.5 mg/mL 标准储备液，于 -18 ℃以下保存，有效期 3 个月。
4.10 混合标准中间液：用甲醇（4.2）将各标准储备液混合，稀释成氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、
丙磺舒、氯噻酮的 1.0 μg/mL 混合标准中间液和乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮的 1.0 μg/mL
的混合标准中间液，于 0 ℃~4 ℃保存，有效期 1 个月。
4.11 基质混合标准工作液：准确吸取一定量的混合标准中间液（4.10），用空白基质溶液逐级稀释
成氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、丙磺舒、氯噻酮浓度为 5.0 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L、
100.0 μg/L和乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮浓度为10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L、
100.0 μg/L、200.0 μg/L 的基质混合标准工作液，现用现配。
4.12 乙二胺 -N- 丙基硅烷化硅胶（PSA）：40 μm~60 μm。
4.13 十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40 μm~60 μm。
4.14 石墨化碳黑（GCB）：40 μm~120 μm。
4.15 微孔滤膜：有机系，0.22 μm。
5 仪器与设备
5.1 液相色谱 - 质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。
5.2 组织捣碎机。
5.3 振荡器。
5.4 涡旋混合器。
5.5 分析天平：感量为 0.000 01 g 和 0.01 g。
5.6 冷冻离心机：10 000 r/min。
5.7 氮气吹干仪。
6 试样制备与保存
6.1 试样制备
6.1.1 猪肉、牛肉、羊肉
猪肉、牛肉、羊肉各约 500 g，放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成 2 份，分别装入清洁容
器内，并标明标记。
6.1.2 鸡蛋
取 16 枚新鲜鸡蛋（约 1 kg），洗净、去壳后充分混匀，均分成 2 份，分别装入清洁容器内，并标
明标记。
6.1.3 牛奶
将牛奶从冰箱中取出，放置至室温、摇匀，备用。
制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
6.2 试样保存
猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋试样于-20 ℃以下条件下保存；牛奶试样置于 0 ℃~4 ℃条件下保存。
7 测定步骤
7.1 提取
称取约 2 g 试样（精确至 0.01 g）置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 乙腈（4.3）和 2 g 磷酸二氢
钾（4.4），振荡提取 30 min 后，于 0 ℃以 9 000 r/min 的转速离心 5 min，取出上清液，再加入 10 mL
乙腈（4.3）重复提取 1 次，离心后合并上清液于 50 mL 离心管中，待净化。
7.2 净化
在 7.1 中的待净化上清液中加入 150 mg 无水硫酸镁（4.5）、50 mg PSA（4.12）、50 mg C18（4.13）、
7.5 mg GCB（4.14），涡旋混合 30 s 后，于 0 ℃以 9 000 r/min 离心 5 min，取全部上清液，于 45 ℃
下用氮气吹至近干，准确加入 2.0 mL 水 -0.1% 甲酸甲醇溶液（4.7）溶解残渣，过 0.22 μm 微孔滤膜
（4.15），供液相色谱 - 质谱/质谱仪测定。
7.3 空白基质提取液
取经测定不含被测组分的试样按 7.1 和 7.2 操作，获得空白基质提取液。
7.4 测定
7.4.1 液相色谱条件
7.4.1.1 色谱柱：C18 色谱柱，150 mm×2.1 mm（内径），粒径 3.5 μm 或性能相当者。
7.4.1.2 柱温：30 ℃。
7.4.1.3 流动相：A 为水，B 为 0.1% 甲酸甲醇溶液（4.6），梯度洗脱，洗脱程序见表 1。
表 1 液相色谱的梯度洗脱程序
时间/min 流动相 A/% 流动相 B/%
0.00 90 10
1.00 90 10
3.5 35 65
11 3 97
11.5 90 10
15 90 10
7.4.1.4 流速：0.3 mL/min。
7.4.1.5 进样量：5 μL。
7.4.2 正离子扫描模式质谱条件
7.4.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）。
7.4.2.2 扫描方式：正离子扫描。
7.4.2.3 检测方式：多反应监测（MRM）。
7.4.2.4 雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气及其他适合气体，使用前应调节各气体流
量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去簇电压、碰撞气能量等参数值应优化至最佳灵敏度，
参考质谱参数参见附录 B。
7.4.3 负离子扫描模式质谱条件
7.4.3.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）。
7.4.3.2 扫描方式：负离子扫描。
7.4.3.3 检测方式：多反应监测（MRM）。
7.4.3.4 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他适合气体，使用前应调节各气
体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去簇电压、碰撞气能量等参数值应优化至最佳灵敏
度，其他参考质谱参数参见附录 B。
7.4.4 液相色谱 - 质谱/质谱测定
7.4.4.1 定性测定
按照液相色谱 - 质谱/质谱条件测定试样和基质混合标准工作液，试样中目标化合物的保留时间
与基质混合标准工作液中对应化合物的保留时间偏差在 ±2.5% 之内；定性离子对的相对丰度与浓度
相当的基质混合标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 2 的规定，且每个离子的信噪比
均≥ 3，则可判断试样中存在相应的被测物。
表 2 定性离子对相对丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/% >50 20~50（含） 10~20（含） ≤ 10
允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50
7.4.4.2 定量测定
将基质混合标准工作液和试样溶液依次注入液相色谱 - 质谱/质谱仪中，测得定量离子峰面积。
待测样液中利尿剂的响应值均应在仪器检测的定量线性响应范围内。在上述仪器条件下，10 种利尿
剂的提取离子色谱图参见附录 C。
7.5 空白试验
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行。
8 结果计算和表述
采用基质匹配标准工作曲线定量，试样中被测物的含量由液相色谱 - 质谱/质谱仪的数据处理软
件或按式（1）计算，计算结果应扣除空白值。
（1）
式中：
Xi--试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；
ci --由基质匹配标准工作曲线得到的样液中待测组分的浓度，单位为微克每升（μg/L）；
V --试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；
m--最终定容体积试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。
注：结果保留 3 位有效数字。
9 检出限、定量限和回收率
9.1 检出限和定量限
猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋、牛奶中氢氯噻嗪、氯噻嗪、氨苯喋啶、丙磺舒、氯噻酮的检出限为
2.00 μg/kg，定量限为 5.00 μg/kg ；乙酰唑胺、呋塞米、精磺胺、螺内酯、坎利酮的检出限为 5.00 μg/kg，
定量限为 10.0 μg/kg。
9.2 回收率
猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋、牛奶中 10 种利尿剂的添加水平和回收率数据参见附录 D。
附 录 A
（资料性附录）
10 种利尿剂的化合物信息
表 A.1 10 种利尿剂的化合物信息
化合物 英文名称 CAS 号 化学式 相对分子质量
氢氯噻嗪 hydrochlorothiazide 58-93-5 C7H8ClN3O4S2 297.74
氯噻嗪 chlorothiazide 58-94-6 C7H6ClN3O4S2 295.72
氨苯喋啶 triamterene 396-01-0 C12H11N7 253.26
丙磺舒 probenecid 57-66-9 C13H19NO4S 285.36
氯噻酮 chlorthalidone 66258-76-2 C23H29N5O8S 535.57
乙酰唑胺 acetazolamide 59-66-5 C4H6N4O3S2 222.25
呋塞米 furosemide 54-31-9 C12H11ClN2O5S 330.74
精磺胺 4-amino-6-chlorobenzene-1,3-disulfonamide 121-30-2 C6H8ClN3O4S2 285.73
螺内酯 spironolactone 52-01-7 C24H32O4S 416.57
坎利酮 canrenone 976-71-6 C22H28O3 340.46
附 录 B
（资料性附录）
a 质谱参考参数 1）
B.1 正离子扫描模式参考质谱条件
B.1.1 电喷雾电压（IS）：5 000 V。
B.1.2 气帘气压力（CUR，kPa）：241（氮气）。
B.1.3 雾化气压力（GS1，kPa）：414（氮气）。
B.1.4 辅助气压力（GS2，kPa）：355（氮气）。
B.1.5 碰撞电压（CE）、去簇电压（DP）见表 B.1。
B.2 负离子扫描模式参考质谱条件
B.2.1 电喷雾电压（IS）：-4 500 V。
B.2.2 气帘气压力（CUR，kPa）：241（氮气）。
B.2.3 雾化气压力（GS1，kPa）：414（氮气）。
B.2.4 辅助气压力（GS2，kPa）：355（氮气）。
B.2.5 碰撞电压（CE）、去簇电压（DP）见表 B.1。
B.3 10 种利尿剂的主要参考质谱参数
详见表 B.1。
1） 非商业性声明：本标准中所列参数是在 AB SCIEX 5500 质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提
供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号仪器。
表 B.1 10 种利尿剂的主要参考质谱参数
序号 化合物名称 母离子（m/z） 扫描模式 子离子（m/z） 去簇电压（DP）/V 碰撞气能量（CE ）/eV
1 氢氯噻嗪 296.0 ESI-
269.0*
-120
-27
205.0 -30
2 氯噻嗪 294.0 ESI-
214.2*
-100
-35
179.0 -55
3 氨苯喋啶 254.2 ESI+
237.0*
120
168.2 46
4 丙磺舒 286.2 ESI+
201.9*
120
120.9 33
5 氯噻酮 337.0 ESI-
145.9*
-120
-40
189.9 -22
6 乙酰唑胺 221.0 ESI+
83.1*
-50
-25
58.1-20
7 呋塞米 329.1 ESI-
285.2*
-35
-20
205.0 -30
8 精磺胺 284.1 ESI-
205.0*
-80
-30
169.1 -30
9 螺内酯 341.1 ESI+
187.2*
150
107.1 35
10 坎利酮 341.1 ESI+
187.2*
150
107.1 35
注：* 表示定量离子对。
附 录 C
（资料性附录）
标准物质的提取离子色谱图
氢氯噻嗪
氢氯噻嗪
氯噻嗪
氯噻嗪
氨苯喋啶
氨苯喋啶
丙磺舒
丙磺舒
氯噻酮
a）
b）
c）
d）
e）
f）
g）
h）
i）
图 C.1 10 种利尿剂标准溶液的提取离子色谱图（5.0 ng/mL）
图 C.1 （续）
氯噻酮
乙酰唑胺
乙酰唑胺
呋塞米
呋塞米
精磺胺
精磺胺
螺内酯
螺内酯
坎利酮
坎利酮
j）
k）
l）
m）
n）
o）
p）
q）
r）
表 D.1 10 种利尿剂在猪肉中的添加水平及其回收率
化合物 添加水平/（μg/kg） 回收率范围/% 相对标准偏差/%
氢氯噻嗪
5.00 81.2~98.1 7.42
10.0 74.6~93.5 8.93
50.0 78.4~93.7 6.84
氯噻嗪
5.00 80.2~99.4 7.66
10.0 80.2~99.7 7.58
50.0 76.5~99.6 10.4
氨苯喋啶
5.00 80.4~103.0 10.1
10.0 83.4~108.0 9.34
50.0 78.7~99.1 8.76
丙磺舒
5.00 78.8~95.7 7.62
10.0 80.3~98.6 7.89
50.0 74.4~98.8 9.93
氯噻酮
5.00 80.3~ 98.7 7.01
10.0 76.9~95.8 9.02
50.0 81.0~97.8 6.10
乙酰唑胺
10.0 72.5~96.7 10.7
20.0 81.2~98.9 6.54
100.0 79.5~98.9 7.93
呋塞米
10.0 75.9~98.7 9.60
20.0 85.6~105.0 7.46
100.0 73.3~96.8 10.1
精磺胺
10.0 83.3 ~101.0 7.16
20.0 81.3~98.2 6.92
100.0 80.2~101.0 8.57
螺内酯
10.0 79.4~99.1 8.26
20.0 75.8~96.6 9.29
100.0 78.8~93.5 7.03
坎利酮
10.0 75.3~93.1 8.63
20.0 75.6~92.5 7.67
100.0 78.9~98.8 8.69
附 录 D
（资料性附录）
添加水平及回收率数据
表 D.2 10 种利尿剂在牛肉中的添加水平及其回收率
化合物 添加水平/（μg/kg） 回收率范围/% 相对标准偏差/%
氢氯噻嗪
5.00 77.2~95.8 8.34
10.0 78.6~92.3 7.07
50.0 80.6~98.6 7.37
氯噻嗪
5.00 80.9~108.3 10.6
10.0 81.6 ~104.1 9.35
50.0 83.6~102.4 7.15
氨苯喋啶
5.00 79.8~101.0 10.5
10.0 78.6~101.9 10.2
50.0 85.6~98.3 5.22
丙磺舒
5.00 73.5~95.6 9.32
10.0 80.3~96.6 7.24
50.0 81.3~99.1 7.35
氯噻酮
5.00 75.6~96.6 9.15
10.0 79.8~98.6 8.33
50.0 82.3~98.7 7.35
乙酰唑胺
10.0 78.9~96.5 8.04
20.0 81.6~95.2 5.76
100.0 80.3~92.1 5.96
呋塞米
10.0 80.3~98.7 7.03
20.0 74.3~95.2 8.66
100.0 80.6~95.8 5.85
精磺胺
10.0 80.6~98.6 7.22
20.0 77.9~95.3 7.17
100.0 80.3~99.4 7.67
螺内酯
10.0 78.8~98.5 8.27
20.0 78.4~ 99.8 9.47
100.0 80.4~96.1 6.69
坎利酮
10.0 71.3~ 98.5 11.8
20.0 77.5~99.1 10.0
100.0 80.2~98.8 8.75
表 D.3 10 种利尿剂在羊肉中的添加水平及其回收率
化合物 添加水平/（μg/kg） 回收率范围/% 相对标准偏差/%
氢氯噻嗪
5.00 78.8~98.1 8.68
10.0 72.5~94.7 10.8
50.0 79.2~96.5 6.52
氯噻嗪
5.00 80.3~ 98.9 8.03
10.0 76.4~97.8 9.21
50.0 71.2~98.7 11.3
氨苯喋啶
5.00 80.6~101.5 8.15
10.0 85.1~101.0 7.48
50.0 80.7~99.2 8.20
丙磺舒
5.00 75.9~ 101.1 11.2
10.0 72.4~95.5 9.28
50.0 81.2~98.7 6.52
氯噻酮
5.00 81.3~ 99.4 7.40
10.0 79.7~98.5 8.32
50.0 82.3~99.7 6.70
乙酰唑胺
10.0 72.7~95.8 10.0
20.0 79.1~100.8 8.38
100.0 80.9~99.8 8.86
呋塞米
10.0 75.6~98.7 8.91
20.0 72.3~93.1 9.39
100.0 76.8~ 91.7 6.18
精磺胺
10.0 75.4~93.3 8.62
20.0 76.4~104.2 10.1
100.0 71.5~97.5 11.4
螺内酯
10.0 79.8~103.5 9.92
20.0 72.6~98.9 11.0
100.0 80.6~98.8 7.09
坎利酮
10.0 75.3~95.6 8.16
20.0 82.3~ 99.7 7.48
100.0 75.3~96.8 8.87
表 D.4 10 种利尿剂在鸡蛋中的添加水平及其回收率
化合物 添加水平/（μg/kg） 回收率范围/% 相对标准偏差/%
氢氯噻嗪
5.00 73.2~101.3 13.0
10.0 78.9~98.5 7.96
50.0 71.3~94.2 9.25
氯噻嗪
5.00 75.6~101.0 11.6
10.0 75.4~101.7 10.5
50.0 84.1~108.5 8.49
氨苯喋啶
5.00 78.3~105.0 11.6
10.0 75.3~104.6 11.1
50.0 76.6~102.0 9.49
丙磺舒
5.00 79.8~96.6 7.86
10.0 80.5~95.6 6.60
50.0 80.3~96.5 6.55
氯噻酮
5.00 75.2~94.3 9.27
10.0 74.3~92.2 8.39
50.0 79.1~98.9 8.64
乙酰唑胺
10.0 75.4~95.6 8.78
20.0 80.2~98.6 7.51
100.0 82.3~99.7 6.83
呋塞米
10.0 71.3~102.3 12.7
20.0 83.0~104.0 9.38
100.0 7......