SN/T 5169-2019 相关标准英文版PDF
| 标准号码 | 价格美元 | 第2步(购买) | 交付天数 | 标准名称 |
| SN/T 5169-2019 | 280 | SN/T 5169-2019 | 3秒自动 | 出口动物源食品中美替诺龙的测定 液相色谱-质谱/质谱法 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | SN/T 5169-2019 (SN/T5169-2019) |
| 中文名称 | 出口动物源食品中美替诺龙的测定 液相色谱-质谱/质谱法 |
| 英文名称 | Determination of methenolone in animal-origin foodstuffs for export -- LC-MS / MS method |
| 行业 | 商检行业标准 (推荐) |
| 中标分类 | C53 |
| 国际标准分类 | 67.050 |
| 字数估计 | 8,810 |
| 发布日期 | 2019 |
| 实施日期 | 2020-05-01 |
| 发布机构 | 海关总署 |
SN/T 5169-2019
(Determination of metenolone in foods of animal origin for export.Liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry)
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
出口动物源食品中美替诺龙的测定 液相色谱 - 质谱/质谱法
Determination of methenolone in animal-origin foodstuffs for export-
LC-MS/MS method
2019-10-25 发布
2020-05-01 实施
中 华 人 民 共 和 国 海 关 总 署 发 布
ICS 67.050
C 53
前言
本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。
本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国武汉海关。
本标准主要起草人：叶诚、罗静、王晗、王鹏、陈孝宇、赵晓亚、尚吟竹、王振华、戴琳。
出口动物源食品中美替诺龙的测定
液相色谱 - 质谱/质谱法
1 范围
本标准规定了出口动物源食品中美替诺龙残留量的液相色谱 - 质谱/质谱的测定方法。
本标准适用于猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋和牛奶中美替诺龙残留量的测定，其他食品也可参照使用。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 方法提要
试样经均质处理和酶解后，采用甲酸 - 乙腈提取，固相萃取或分散固相萃取方法净化，液相
色谱 - 质谱/质谱仪测定，内标法定量。
4 试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
4.1 甲醇（CH3OH，CAS 号：67-56-1）：色谱纯。
4.2 乙腈（CH3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。
4.3 甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）：色谱纯。
4.4 乙酸（CH3COOH，CAS 号：64-19-7）。
4.5 无水乙酸钠（CH3COONa，CAS 号：127-09-3）。
4.6 无水硫酸钠（Na2SO4，CAS 号：7757-82-6）。
4.7 无水硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9）。
4.8 β- 葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶溶液：β- 葡萄糖醛酸酶活力 >100 000 units/mL ；芳基硫酸酯酶
活力＜ 20 000 units/mL。
4.9 美替诺龙标准物质（C20H30O2，CAS 号：153-00-4）：纯度大于等于 99%。
4.10 甲睾酮 -d3 标准物质（C20H27D3O2，CAS 号：96425-03-5）：纯度大于等于 98%。
4.11 1% 甲酸乙腈溶液：量取 1.0 mL 甲酸（4.3），用乙腈（4.2）定容至 100 mL，混匀。
4.12 0.1% 甲酸水溶液：量取 1.0 mL 甲酸（4.3），用水定容至 1 000 mL，混匀。
4.13 定容液：量取 70 mL 0.1 % 甲酸水溶液（4.12）和 30 mL 乙腈（4.2），混匀。
4.14 0.2 mol/L 乙酸钠缓冲液：称取 16.4 g 无水乙酸钠（4.5），溶解于 1 000 mL 水中，用适量乙酸
（4.4）调节 pH 至 5.2。
4.15 美替诺龙标准储备液：称取适量美替诺龙标准物质（4.9）（精确至 0.000 1 g），用甲醇（4.1）
溶解，配制成浓度为 1 000 mg/L 的标准储备液，置于 -18℃ 条件下避光保存，有效期 3 个月。
4.16 甲睾酮 -d3 内标储备液：称取适量甲睾酮 -d3 标准物质（4.10，精确至 0.000 1 g），用甲醇（4.1）
溶解，配制成浓度为 100 mg/L 的标准储备液，置于 -18 ℃ 条件下避光保存，有效期 3 个月。
4.17 美替诺龙标准中间溶液：根据需要准确移取适量美替诺龙标准储备液（4.15），用甲醇（4.1）
稀释，配制成浓度为 100 μg/L 的标准中间溶液，置于 -18 ℃ 条件下避光保存，有效期 1 个月。
4.18 甲睾酮 -d3 内标工作溶液：根据需要准确移取适量甲睾酮 -d3 内标储备液（4.16），用甲醇（4.1）
稀释，配制成浓度为 100 μg/L 的内标工作溶液，置于 -18 ℃ 条件下避光保存，有效期 1 个月。
4.19 标准工作溶液：准确移取适量美替诺龙标准中间溶液（4.17）和甲睾酮 -d3 内标工作溶液（4.18），
用初始流动相稀释成浓度分别为 0.5 μg/L、1.0 μg/L、2.0 μg/L、5.0 μg/L、10 μg/L 和 20 μg/L 的
系列标准溶液，并保证各标准溶液中甲睾酮 -d3 的内标浓度为 5 μg/L。
4.20 PRiME HLB 固相萃取柱：6 mL（200 mg）或性能相当者。
4.21 乙二胺 -N- 丙基硅烷化硅胶（PSA）：40 μm~60 μm。
4.22 十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40 μm~60 μm。
4.23 微孔滤膜：通用型，0.22 μm。
5 仪器与设备
5.1 液相色谱 - 质谱/质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。
5.2 组织捣碎机。
5.3 振荡器。
5.4 涡旋混合器。
5.5 电子分析天平：感量为 0.000 1 g 和 0.01 g。
5.6 高速冷冻离心机：转速不低于 8 000 r/min。
5.7 氮气吹干仪。
5.8 pH 计。
5.9 水浴锅。
6 试样制备与保存
6.1 试样制备
6.1.1 猪肉、牛肉、羊肉
猪肉、牛肉、羊肉各约 500 g，放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成 2 份，分别装入清洁容
器内，并标明标记。
6.1.2 鸡蛋
取 16 枚新鲜鸡蛋（约 1 kg），洗净、去壳后充分混匀，均分成 2 份，分别装入清洁容器内，并标
明标记。
6.1.3 牛奶
将牛奶从冰箱中取出，放置至室温、摇匀，备用。
制样操作过程中，应防止样品受到污染或者发生残留物含量的变化。
6.2 试样保存
猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋试样于-20 ℃ 以下条件下保存；牛奶试样置于 0 ℃~4 ℃ 条件下保存。
7 测定步骤
7.1 酶解
称取 2 g 试样（精确至 0.01g）置于 50 mL 具塞离心管中，准确加入 100 μL 甲睾酮 -d3 内标工作
溶液（4.18）和 5 mL 0.2 mol/L 乙酸钠缓冲液（4.14），充分混匀，再加 50 μLβ- 葡萄糖醛酸酶/芳基
硫酸酯酶溶液（4.8），涡旋混匀后，37 ℃±1 ℃ 水浴酶解 12 h。
7.2 提取
7.2.1 猪肉、牛肉、羊肉
取出离心管冷却至室温，加入 15 mL 1% 甲酸乙腈溶液（4.11），涡旋混匀 1 min，置于振荡器振荡
30 min，以8 000 r/min转速离心10 min（温度低于5 ℃），收集上清液，置于另一50 mL离心管内，待净化。
7.2.2 鸡蛋、牛奶
取出离心管冷却至室温，加入 20 mL 1% 甲酸乙腈溶液（4.11），加入 5 g 无水硫酸钠（4.6），涡
旋混匀 1 min，置于振荡器振荡 30 min，以 8 000 r/min 转速离心 10 min（温度低于 5 ℃），收集上层
有机相，置于另一 50 mL 离心管内，待净化。
7.3 净化
7.3.1 猪肉、牛肉、羊肉
精确移取 7.2.1 中的待净化上清液 10 mL 至 PRiME HLB 固相萃取柱（4.20）中，保持 1 滴/s~2 滴/s
的流速，收集全部流出液于玻璃试管中，在 45 ℃ 下用氮气吹干。残留物用 1.0 mL 定容液（4.13）
溶解，涡旋混匀，过 0.22 μm 微孔滤膜（4.23），供液相色谱 - 质谱/质谱仪测定。
7.3.2 鸡蛋、牛奶
精确移取 7.2.2 中的待净化液 10 mL 于 50 mL 离心管中，加入 100 mg PSA（4.21）、40 mg C18（4.22）
和 600 mg 无水硫酸镁（4.7），盖上离心管盖，涡旋混合 30 s，以 8 000 r/min 的转速离心 10 min，取
全部上清液于玻璃试管中，在 45 ℃ 下用氮气吹干，残留物用 1.0 mL 定容液（4.13）溶解，涡旋混匀，
过 0.22 μm 微孔滤膜（4.23），供液相色谱 - 质谱/质谱仪测定。
7.4 测定
7.4.1 液相色谱条件
7.4.1.1 色谱柱：C18 色谱柱，50 mm×2.1 mm（内径），粒径 3.5 μm 或性能相当者。
7.4.1.2 柱温：40 ℃。
7.4.1.3 流动相：A 为 0.1 % 甲酸水溶液（4.12），B 为乙腈（4.2），梯度洗脱，梯度洗脱程序见表 1。
表 1 液相色谱的梯度洗脱程序
时间/min 流动相 A/% 流动相 B/%
0 90 10
1 50 50
8 10 90
10 90 10
7.4.1.4 流速：0.3 mL/min。
7.4.1.5 进样量：10 μL。
7.4.2 质谱条件
7.4.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）。
7.4.2.2 扫描方式：正离子扫描。
7.4.2.3 检测方式：多反应监测模式（MRM）。
7.4.2.4 监测离子对、定量离子对见表 2。
表 2 美替诺龙的监测离子对、定量离子对和甲睾酮 -d3 的定量离子对
被测物 监测离子对（m/z） 定量离子对（m/z）
美替诺龙
303.1/83.0
303.1/187.2
303.1/83.0
甲睾酮 -d3 - 306.1/97.1
7.4.2.5 使用前应调节各参数，使质谱灵敏度达到检测要求，参考质谱条件参见附录 A。
7.4.3 液相色谱 - 质谱/质谱测定
7.4.3.1 定性测定
按照液相色谱 - 质谱/质谱条件测定试样和标准工作液，试样中目标化合物的保留时间与标准工
作溶液中对应化合物的保留时间偏差在 ± 2.5% 之内；定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作
液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 3 的规定，且每个定性离子的信噪比均≥ 3，则可判断试
样中存在相应的被测物。
表 3 定性离子对相对丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/% >50 20~50（含） 10~20（含） ≤ 10
允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50
7.4.3.2 定量测定
将标准工作液和试样溶液依次注入液相色谱 - 质谱/质谱仪中，测得定量离子峰面积。标准工作
溶液和待测液中，美替诺龙、内标甲睾酮 -d3 的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述仪器条件
下，美替诺龙标准溶液的提取离子色谱图及内标甲睾酮 -d3 的提取离子色谱图参见附录 B。
7.5 空白试验
除不称取试样外，均按上述测定条件和步骤进行。
8 结果计算和表述
采用标准工作曲线定量，试样中美替诺龙的含量由液相色谱 - 质谱/质谱仪的数据处理软件或按
式（1）计算，计算结果应扣除空白值。
（1）
式中：
X--试样中被测组分含量，单位为微克每千克（μg/kg）；
c --从标准工作曲线得到的样液中被测组分溶液浓度，单位为微克每升（μg/L）；
V--提取液体积，单位为毫升（mL）；
m--试样质量，单位为克（g）；
f --稀释因子。
注：结果保留 3 位有效数字。
9 检出限、定量限和回收率
9.1 检出限和定量限
猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋、牛奶中美替诺龙的检出限为 0.5 μg/kg，定量限为 1.0 μg/kg。
9.2 回收率
猪肉、牛肉、羊肉、鸡蛋、牛奶中美替诺龙的添加水平和回收率数据参见附录 C。
附 录 A
（资料性附录）
a 质谱参考参数 1）
A.1 干燥器温度：325 ℃。
A.2 干燥器流量：6 L/min。
A.3 雾化器压力：40 psi。
A.4 毛细管电压：3 500 V。
A.5 美替诺龙和甲睾酮 -d3 的主要参考质谱参数见表 A.1。
1） 非商业性声明：本标准中所列参数是在 Agilent 6460 质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供
参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号仪器。
表 A.1 美替诺龙和甲睾酮 -d3 的主要参考质谱参数
化合物名称 母离子（m/z） 子离子（m/z） 扫描模式 碎裂电压（DP）/V 碰撞气电压（CE）/eV
美替诺龙 303.1
83.0*
ESI+ 140
187.2 20
甲睾酮 -d3 306.1 97.1 ESI
+ 100 30
注：*......