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| 标准编号 | GB 29688-2013 (GB29688-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 牛奶中氯霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | Determination of Chloramphenicol residues in milk by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.020 | | 字数估计 | 12,177 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 采用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 标准依据 | 农业部公告第1927号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部、中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了牛奶中氯霉素残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶中氯霉素残留量的检测。 | GB 29688-2013
Determination of Chloramphenicol residues in milk by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric method
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
牛奶中氯霉素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
2013-09-16发布
2014-01-01实施
中 华 人 民 共 和 国 农 业 部
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布
食品安全国家标准
牛奶中氯霉素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
1 范围
本标准规定了牛奶中氯霉素残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于牛奶中氯霉素残留量的检测。
2 规范性引用文件
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GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试料中残留的氯霉素,用乙酸乙酯提取,正己烷除脂,C18柱净化,液相色谱-串联质谱测定,内标法
定量。
4 试剂和材料
以下所用的试剂,除特别注明者外均为分析纯试剂;水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 氯霉素标准品:含量≥97%。
4.2 内标物:氘代氯霉素标准品:含量为100μg/mL(作为内标物标准贮备液)。
4.3 甲醇:色谱纯。
4.4 乙腈:色谱纯。
4.5 乙酸乙酯。
4.6 氯化钠。
4.7 正己烷。
4.8 C18固相萃取柱:500mg/3mL,或相当者。
4.9 4%氯化钠溶液:取氯化钠4g,用水溶解并稀释至100mL。
4.10 100μg/mL氯霉素标准贮备液:精密称取氯霉素标准品10mg,于100mL量瓶中,用甲醇溶解并
稀释至刻度,配制成浓度为100μg/mL的氯霉素标准贮备液。-20℃以下保存,有效期1年。
4.11 100μg/L氯霉素标准工作溶液:精密量取100μg/mL氯霉素标准贮备溶液100μL,于100mL
量瓶中,用50%乙腈溶解并稀释至刻度,配制成浓度为100μg/L的标准工作液。2℃~8℃保存,有效
期1个月。
4.12 20μg/L氘代氯霉素标准工作溶液:精密量取氘代氯霉素标准品20μL,于1000mL量瓶中,用
50%乙腈溶解并稀释至刻度,配制成浓度为20μg/L的氘代氯霉素标准工作液。2℃~8℃保存,有效
期3个月。
5 仪器和设备
5.1 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源。
5.2 分析天平:感量0.00001g。
5.3 天平:感量0.01g。
5.4 旋涡振荡器。
5.5 振荡器。
5.6 组织匀浆机。
5.7 冷冻离心机。
5.8 旋转蒸发仪。
5.9 离心管:50mL。
5.10 鸡心瓶:50mL。
5.11 固相萃取装置。
5.12 氮吹仪。
5.13 滤膜:0.22μm。
6 试料的制备与保存
6.1 试料的制备
取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶,混合,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存
-20℃以下保存。
7 测定步骤
7.1 提取
取试料10g±0.05g,于50mL离心管中,加氘代氯霉素内标工作液250μL,再加乙酸乙酯20mL,
振荡15min,6000r/min离心10min,取乙酸乙酯层液于鸡心瓶中。再加乙酸乙酯20mL重复提取一
次,合并两次提取液于鸡心瓶中,于45℃水浴旋转蒸发至干。用4%氯化钠溶液5mL溶解残留物,加
正己烷5mL振荡混合1min,静置分层,弃正己烷液。再加正己烷5mL,重复提取一次。取下层液
备用。
7.2 净化
C18柱依次用甲醇5mL和水5mL活化,取备用液过柱,控制流速1滴/(3s~4s),用水5mL淋
洗,抽干,用甲醇5mL洗脱,收集洗脱液,于50℃氮气吹干。用50%乙腈1.0mL溶解残余物,涡旋混
匀,滤膜过滤,供液相色谱-串联质谱测定。
7.3 标准曲线的制备
精密量取100μg/L氯霉素标准工作溶液和20μg/L氘代氯霉素内标工作溶液适量,用流动相稀
释,配制成氯霉素浓度为0.10、0.25、0.50、1.0、2.0、5.0μg/L,氘代氯霉素浓度为5μg/L的系列标准溶
液,供液相色谱-串联质谱仪测定。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制
标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.4 测定
7.4.1 液相色谱条件
7.4.1.1 色谱柱:C18(150mm×2.1mm,粒径5μm),或相当者。
7.4.1.2 柱温:30℃。
7.4.1.3 流速:0.2mL/min。
7.4.1.4 进样量:20μL。
7.4.1.5 运行时间:8min。
7.4.1.6 流动相:乙腈+水(50+50,体积比)。
7.4.2 质谱条件
7.4.2.1 电离模式:ESI。
7.4.2.2 扫描方式:负离子扫描。
7.4.2.3 检测方式:多反应检测。
7.4.2.4 电离电压:2.8kV。
7.4.2.5 源温:120℃。
7.4.2.6 雾化温度:350℃。
7.4.2.7 锥孔气流速:50L/h。
7.4.2.8 雾化气流速:450L/h。
7.4.2.9 数据采集窗口:8min。
7.4.2.10 驻留时间:0.3s。
7.4.2.11 定性、定量离子及对应的锥孔电压和碰撞电压:见表1。
表1 氯霉素定性、定量离子对和锥孔电压及碰撞电压
药物
定性离子对
m/z
定量离子对
m/z
锥孔电压
碰撞电压
氯霉素(CAP)
321/151.6
321/256.8
321/151.6 30
氘代氯霉素
(D5-CAP)
325.8/156.6 325.8/156.6 30 15
7.4.3 测定法
取试样溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按内标法以峰面积比计算。对照溶液及试样溶
液中氯霉素和氘代氯霉素的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。试样溶液中的离子相对丰度与标
准溶液的离子相对丰度比符合表2的要求。标准溶液和空白组织添加试样溶液的总离子流和选择离子
流图见附录A。
表2 试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围
相对丰度
允许偏差
>50 ±20
>20~50 ±25
>10~20 ±30
≤10 ±50
7.5 空白试验
除不加试料外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
8 结果计算和表述
计算A321/151.6/A325.8/156.6峰面积比值,标准曲线校准。
由标准曲线方程:
As/A′is=a×cs/c′is+b (1)
求得a和b,则
c=
c′is
Ais-
÷b (2)
试料中氯霉素残留量按式(3)计算:
X=
c×V
(3)
式中:
As---对照溶液中氯霉素的峰面积;
A′is---对照溶液中内标氘代氯霉素的峰面积;
cs ---对照溶液中内标氘代氯霉素的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
c′is ---对照溶液中氯霉素的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
c ---供试溶液中氯霉素的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
A ---试样中氯霉素的峰面积;
Ais---试样中内标氘代氯霉素的峰面积;
X ---供试试料中氯霉素的残留量,单位为微克每千克(μg/kg);
V ---溶解残余物的体积,单位为毫升(mL);
m ---供试试料质量,单位为克(g)。
注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字。
9 检测方法灵敏度、准确度和精密度
9.1 灵敏度
本方法检测限为0.01μg/kg,定量限为0.1μg/kg。
9.2 准确度
本方法在0.02μg/kg~0.10μg/kg添加浓度水平上的回收率为50%~120%。
9.3 精密度
本方法的批内相对标......
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