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| 标准编号 | GB/T 31792-2015 (GB/T31792-2015) | | 中文名称 | 向日葵茎溃疡病菌检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Detection and identification of Diaporthe helianthi Muntanola-Cvetkovic Mihaljcevic et Petrov | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 15,195 | | 发布日期 | 2015-07-03 | | 实施日期 | 2015-11-27 | | 标准依据 | 国家标准公告2015年第22号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 31792-2015
Detection and identification of Diaporthe helianthi Muntanola-Cvetkovic Mihaljcevic et Petrov
ICS 65.020.01
B16
中华人民共和国国家标准
向日葵茎溃疡病菌检疫鉴定方法
2015-07-03发布
2015-11-27实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。
本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、中国合格评定国家认可中心、中华人民共和国新疆出
入境检验检疫局。
本标准主要起草人:吴品珊、杜洪忠、蔡露敏、张祥林、严进。
向日葵茎溃疡病菌检疫鉴定方法
1 范围
本标准规定了向日葵茎溃疡病菌的检疫鉴定方法。
本标准适用于向日葵植株和种子中向日葵茎溃疡病菌的检疫和鉴定。
2 仪器和用具
2.1 仪器
体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、光照培养箱、电子天平(1/1000g)、高压灭菌锅、冰箱、PCR
扩增仪、荧光PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像仪、高速冷冻离心机、恒温水浴锅。
2.2 用具
烧杯、三角瓶、量筒、试管、培养皿、酒精灯、镊子、剪刀、解剖刀、接种针、载玻片、盖玻片、塑料研杵、
移液器、移液器吸头、离心管、液氮罐、样品筛(10目,ϕ1.7mm)。
3 试剂和培养基
3.1 试剂
葡萄糖,链霉素,乳酸,琼脂,1.0%次氯酸钠(NaClO),液氮,Tris-HCl,MgCl2,HCl,EDTA,NaOH,
NaOAc,KCl,Tris,CTAB,TAE,无水乙醇(Ethanol),三氯甲烷(Chloroform),异丙醇(Isopropanol),异
戊醇(Isoamylalcohol),SYBRGreenⅠ核酸染料,蛋白酶K,TaqDNA聚合酶,dNTP,通用引物ITS5
和ITS4,实时荧光PCR特异性引物DH-F、DH-R及探针DH-Pr。
3.2 培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),链霉素马铃薯葡萄糖琼脂培养基(SPDA)。具体配方参见附
录A。
4 检疫鉴定方法
4.1 症状检查
采集田间疑似症状的茎杆、病叶或葵盘,剪取病健交界处的组织材料备用。病害典型的症状是茎杆
和叶柄处有淡褐色溃疡病斑,详见附录A病害症状描述。
在种子中挑选干瘪、变色、皱缩、残缺或霉......
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