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| 标准编号 | GB/T 31808-2015 (GB/T31808-2015) | | 中文名称 | 向日葵白锈病菌检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Detection and identification of Albugo tragopogonis (Pers.) S. F. Gray | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 11,137 | | 发布日期 | 2015-07-03 | | 实施日期 | 2015-11-27 | | 标准依据 | 国家标准公告2015年第22号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 31808-2015
ICS 65.020.01
B16
中华人民共和国国家标准
向日葵白锈病菌检疫鉴定方法
2015-07-03发布
2015-11-27实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国新疆出入境检验检疫局、新疆生产建设兵团农业技术推广总站。
本标准主要起草人:张祥林、王翀、赵冰梅、王文正、张江国、乾义柯。
向日葵白锈病菌检疫鉴定方法
1 范围
本标准规定了向日葵白锈病菌的检疫鉴定方法。
本标准适用于向日葵种子和植株中向日葵白锈病菌的检疫和鉴定。
2 仪器和用具
生物显微镜、体视显微镜、超净工作台、高压灭菌器、高速离心机、制冰机、全温水浴、PCR扩增仪、
电泳仪、凝胶成像仪、往复式振荡器、培养皿、烧杯、酒精灯、三角瓶、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、量筒、
吸管。
3 试剂
乳酸、苯酚、甘油、棉蓝、藏红花、次氯酸钠(NaClO),十二烷基硫酸钠(SDS),三羟甲基氨基甲烷-盐
酸(Tris-HCl),氯化镁(MgCl2),乙二胺四乙酸四钠盐(EDTA),氢氧化钠(NaOH),醋酸钠(NaOAc),
氯化钾(KCl),十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),无水乙醇(Ethanol),苯酚(Phenol),三氯甲烷(Chloro-
form),异丙醇(Isopropanol),异戊醇(Isoamylalcohol),核酸染料(SYBRGreenⅠ),蛋白酶 K,Taq
DNA聚合酶(Taq DNApolymerase),脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP),DNA 分子量标记(DNA
Marker),TAE电泳缓冲液(TAEbuffer)。
4 检疫鉴定方法
4.1 田间症状检查
在向日葵现蕾中期至盛花期,到向日葵隔离种植区或大田进行调查,观察向日葵植株发病情况。
4.2 种子带菌检查
选取5g瘪小的向日葵种子,置于干净三角瓶中,加入200mL清水和少量洗衣粉,在往复式振荡器
上振荡10min,倒去洗涤液,再加入等量的清水,重复洗涤3次~5次,直至洗净向日葵种子上的种衣剂
(如无种子包衣,可省略此步),晾干,剥开向日葵种子,将果皮和种仁一起放入装有乳酚油的烧杯中,酒
精灯下煮沸3min,冷却后在解剖镜下用镊子剥取内果皮和种皮,放入一干净培养皿中,加入少量棉蓝-
藏红花染色液,静置5h左右,用95%乙醇清洗后,用镊子夹取内果皮或种皮置于载玻片上,加一滴乳酚
油作浮载剂,盖片镜检。
4.3 病原菌形态观察
用干净刀片刮取少量向日葵病叶背面(或叶柄、花盘等)的白色疱斑中的病菌,置于载玻片上,在生
物......
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