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| 标准编号 | GB/T 31809-2015 (GB/T31809-2015) | | 中文名称 | 油棕猝倒病菌检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Detection and identification of Pythium splendens Braun | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 15,17 | | 发布日期 | 2015-07-03 | | 实施日期 | 2015-11-27 | | 标准依据 | 国家标准公告2015年第22号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 31809-2015
Detection and identification of Pythium splendens Braun
ICS 65.020.01
B16
中华人民共和国国家标准
油棕猝倒病菌检疫鉴定方法
2015-07-03发布
2015-11-27实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检疫
局、中国检验检疫科学研究院。
本标准主要起草人:张慧丽、张建成、顾建锋、郑炜、徐瑛、陈先锋、段维军、陈吴健、吴志毅、杜洪忠、
吴品珊。
油棕猝倒病菌检疫鉴定方法
1 范围
本标准规定了油棕猝倒病菌的形态学和分子生物学检疫鉴定方法。
本标准适用于油棕猝倒病菌寄主植物的植株、插枝等植物材料及介质的检疫鉴定。
2 仪器设备
生物显微镜(具油镜镜头)、具透射光源的体视显微镜(最大放大倍数不低于50×)、高压灭菌锅、天
平(感量1/100g,1/10000g)、研钵、制冰机、纯水仪、涡旋振荡器、台式离心机、分光光度计、高速冷冻
离心机、真空抽干仪、低温冰箱、冷藏冷冻冰箱、超净工作台、普通PCR仪、光学PCR反应管、pH计、电
泳仪、水平电泳槽、实时荧光PCR仪、微量移液器(0.5μL、2μL、10μL、20μL、100μL、200μL、
1000μL)、PCR反应管(0.2mL、0.5mL)、锥形瓶、试管、培养皿、载玻片、盖玻片。
3 主要试剂和培养基
除另有规定外,所有试剂均采用分析纯。无菌双蒸水、液氮、蛋白酶K、氢氧化钠、醋酸铵、氯化钾、
无水乙醇、溴化乙锭、三氯甲烷、异丙醇、异戊醇、氨苄青霉素、利福平、制霉菌素、苯菌灵、氯化钠、
CTAB、TaqDNA聚合酶、dNTP混合物、10×PCR 缓冲液、琼脂糖、DNA分子量标准、Tris/EDTA/
SDS提取缓冲液(TES)、Tris/EDTA缓冲液(TE)、Tris硼酸盐EDTA缓冲液(TBE)等。培养基及缓
冲液配制方法见附录B。
4 检疫鉴定
4.1 症状检查
仔细检查根部,根部症状是软化变褐,腐烂;茎部症状是出现灰色或棕黑色水渍状斑点(参见
附录A)。对可疑植物和繁殖材料的介质土应取样做进一步检验。
4.2 组织分离
选萎蔫及根部变褐但没有完全腐烂的植物材料,用流动的自来水冲洗干净,在根茎病健交界处切取
0.5cm×0.5cm的小块组织,用1%次氯酸钠进行表面消毒3min,无菌水冲洗3次,灭菌滤纸吸干表面
水分后,置于选择性培养基上,25℃~30℃黑暗培养,每天观察,待长出菌丝后,挑取菌丝尖端转移到
基础培养基上纯化,保存备用。
4.3 土壤诱集
对禾本科植物叶片(如:马唐、狗尾草、稗草等)进行高温高压灭菌处理,剪成直径1cm大小的小片
作为诱饵。取5g~20g土壤样品研磨破碎放入50mL灭菌洁净烧杯中,厚度不超过2cm,缓慢加入无
菌水没......
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