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| 标准编号 | GB/T 37544-2019 (GB/T37544-2019) | | 中文名称 | 化妆品中邻伞花烃-5-醇等6种酚类抗菌剂的测定 高效液相色谱法 | | 英文名称 | Determination of 6 kinds of phenolic antibacterial agent including o-cymen-5-ol in cosmetics - High performance liquid chromatography | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | Y42 | | 国际标准分类 | 71.100.70 | | 字数估计 | 10,119 | | 发布日期 | 2019-06-04 | | 实施日期 | 2020-01-01 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 37544-2019
Determination of 6 kinds of phenolic antibacterial agent including o-cymen-5-ol in cosmetics--High performance liquid chromatography
ICS 71.100.70
Y42
中华人民共和国国家标准
化妆品中邻伞花烃-5-醇等6种酚类
抗菌剂的测定 高效液相色谱法
2019-06-04发布
2020-01-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中国国家标准化管理委员会 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由中国轻工业联合会提出。
本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。
本标准起草单位:江苏省产品质量监督检验研究院、苏州世谱检测技术有限公司、无限极(中国)有
限公司、上海市日用化学工业研究所、广州华鑫检测技术有限公司、欧诗漫生物股份有限公司、完美(广
东)日用品有限公司、广州质量监督检测研究院、苏州质量检测科学研究院、江苏省食品药品监督检验研
究院。
本标准主要起草人:张晓强、卢剑、黄金凤、孙红梅、寻知庆、李晓敏、代丹、廖华勇、沈敏、张丽华、
戴结玲、张征、邹洁、杨安全、袁利文、彭玉睿、李海、赵春晓、王常捷、康薇、武中平、杨洋、曲梅、孙姗姗、
曹倩文、叶竹洪、施兵、叶嘉荣、汪晨霞、刘香梅、陈意光、冼燕萍、侯向昶、吴玉銮、郭新东。
引 言
本标准的被测物质苯酚、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚是我国《化妆品安全技术规范
(2015年版)》规定的禁用物质。
禁用物质是指不能作为化妆品生产原料即组分添加到化妆品中的物质。《化妆品安全技术规范
(2015年版)》规定:若技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时,应进行安全性风险评估,确保
在正常、合理及可预见的使用条件下不得对人体健康产生危害。
目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。
化妆品中邻伞花烃-5-醇等6种酚类
抗菌剂的测定 高效液相色谱法
1 范围
本标准规定了化妆品中苯酚、对氯间甲酚、邻伞花烃-5-醇、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三氯苯酚、五氯苯
酚6种酚类抗菌剂的高效液相色谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、试验步骤、结果计算、回收
率与精密度、允许差等内容。
本标准适用于化妆品中苯酚、对氯间甲酚、邻伞花烃-5-醇、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三氯苯酚、五氯苯
酚6种酚类抗菌剂的测定。
本标准的方法检出限和定量限:水剂类、乳液类、膏霜类、粉类化妆品中苯酚、对氯间甲酚、邻伞花烃-5-
醇、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚的方法检出限为2.5mg/kg,方法定量限为8.5mg/kg;蜡基类
化妆品中苯酚、对氯间甲酚、邻伞花烃-5-醇、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚的方法检出限为
5.0mg/kg,方法定量限为17.0mg/kg。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试样中的苯酚、对氯间甲酚、邻伞花烃-5-醇、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚经溶剂提取,
离心过滤后,用配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪测定,保留时间和光谱图定性,外标法定量。
高效液相色谱-质谱/质谱法确证。
4 试剂和材料
4.1 水:GB/T 6682规定的一级水。
4.2 乙腈:色谱纯。
4.3 甲酸:色谱纯。
4.4 乙酸铵:色谱纯。
4.5 乙腈水溶液:准确量取70mL乙腈(4.2)和30mL水,混匀后备用。
4.6 标准物质:纯度不小于98%。苯酚、对氯间甲酚、邻伞花烃-5-醇、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三氯苯酚、
五氯苯酚的中文名称、INCI名称(国际化妆品原料名称)、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及
化学结构式参见附录A表A.1。
4.7 混合标准工作溶液:分别准确称取适量标准物质(4.6)(精确至0.1mg),用乙腈(4.2)配制成质量
浓度为2000μg/mL的标准储备溶液(于4℃避光保存,可保存6个月)。准确吸取各标准储备溶液
500.0μL于10mL容量瓶中,用乙腈水溶液(4.5)定容,混匀,得到混合标准储备溶液(100.0μg/mL,
4℃避光保存)。准确移取适量混合标准储备溶液,用乙腈水溶液(4.5)逐级稀释成质量浓度为0.10μg/mL、
0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.50μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL和50.0μg/mL的系列
混合标准工作溶液(现配现用)。
4.8 微孔滤膜:孔径为0.22μm的有机过滤膜。
5 仪器设备
实验室常规设备,及下列仪器:
a) 高效液相色谱(HPLC)仪:配有二极管阵列检测器;
b) 高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪;
c) 分析天平:感量0.001g和0.0001g;
d) 涡旋振荡器;
e) 超声波清洗仪:超声功率250W;
f) 离心机:最大转速不低于4000r/min。
6 试验步骤
6.1 试样处理
6.1.1 水剂类、乳液类、膏霜类、粉类化妆品
称取试样0.2g(精确至0.001g)于15mL具塞塑料离心管中,加乙腈水溶液(4.5)至5.0mL,涡旋
振荡2min,超声提取10min,4000r/min离心5min,取上清液过0.22μm滤膜,待测定。
6.1.2 蜡基类化妆品
称取试样0.1g(精确至0.001g)于15mL具塞塑料离心管中,加入0.5mL四氢呋喃,涡旋至样品
全部溶解,再加乙腈水溶液(4.5)至5.0mL,涡旋振荡2min,超声提取10min,4000r/min离心5min,
取上清液过0.22μm滤膜,待测定。
6.2 测定条件
高效液相色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:多环芳烃专用色谱柱,5μm,250mm×4.6mm(内径),或相当者;
b) 流动相:乙腈-10mmol/L乙酸铵水溶液[用甲酸(4.3)调至pH5.0],梯度洗脱程序参见表1;
c) 流速:1.2mL/min;
d) 柱温:30℃;
e) 检测波长:280nm;
f) 进样量:20μL。
表1 梯度洗脱程序
时间/min 10mmol/L乙酸铵水溶液(pH5.0)/% 乙腈/%
0.0 80 20
7.0 70 30
10.0 65 35
20.0 65 35
23.0 10 90
表1(续)
时间/min 10mmol/L乙酸铵水溶液(pH5.0)/% 乙腈/%
30.0 10 90
31.0 80 20
39.0 80 20
6.3 标准工作曲线绘制
按测定条件(6.2)对系列混合标准工作溶液(4.7)进行测定,以色谱峰的峰面积为纵坐标,对应的溶
液浓度为横坐标作图,绘制标准工作曲线。
6种标准物质的高效液相色谱图参见附录B图B.1。
6.4 试样测定
按测定条件(6.2)对试样溶液进行测定,试样溶液中的被测物根据保留时间和光谱图定性。由试样
溶液的峰面积,从标准曲线上查出相应的被测物浓度。试样溶液中被测物的响应值均应在仪器测定的
线性范围之内,超出线性范围的试样溶液需用乙腈水溶液(4.5)稀释后再测定。必要时,用高效液相色
谱-质谱/质谱法进行确证实验,参见附录C。
6.5 空白试验
除不加入试样外,均按6.1~6.2进行测定。
7 结果计算
按式(1)计算试样中被测物的含量:
w=
(ρ-ρ0)×V×1000
m×1000
(1)
式中:
w ---试样中各被测物的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
ρ ---试样溶液中各被测物峰面积对应的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
ρ0---空白试验中各被测物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
V ---定容体积,单位为毫升(mL);
m ---试样质量,单位为克(g)。
计算结果精确至小数点后一位数字。
8 回收率与精密度
水剂类、乳液类、膏霜类、粉类化妆品中,苯酚、对氯间甲酚、邻伞花烃-5-醇、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三
氯苯酚、五氯苯酚在添加浓度为8.5mg/kg~85.0mg/kg范围内,回收率在80%~110%之间,相对标
准偏差小于10%;
蜡基类化妆品中,苯酚、对氯间甲酚、邻伞花烃-5-醇、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚在添
加浓度为17.0mg/kg~170.0mg/kg范围内,回收率在80%~110%之间,相对标准偏差小于10%。
9 允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
附 录 A
(资料性附录)
6种酚类抗菌剂标准物质的信息
6种酚类抗菌剂的中文名称、INCI名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量及化学结构式参
见表A.1。
表A.1 6种酚类抗菌剂的中文名称、INCI名称/英文名称、CAS号、分子式、
相对分子质量及化学结构式
中文名称 INCI名称 英文名称 CAS号 分子式 相对分子质量 化学结构式
苯酚 - phenol 108-95-2 C6H5OH 94.1
对氯间甲酚 p
-chloro-m-
cresol
4-chloro-
m-cresol
59-50-7 C7H7ClO 142.6
邻伞花烃-5-醇 o-cymen-5-ol
4-isopropyl-
m-cresol
3228-02-2 C10H14O 150.2
4-叔丁基苯酚 -
4-tert-
butylphenol
98-54-4 C10H14O 150.2
2,4,6-三氯苯酚 -
2,4,6-trichlor
ophenol
88-06-2 C6H3Cl3O 197.5
五氯苯酚 - p
entachlorop
henol
87-86-5 C6HCl5O 266.3
附 录 B
(资料性附录)
苯酚、对氯间甲酚、邻伞花烃-5-醇、4-叔丁基苯酚、2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚高效液相色谱图
6种酚类抗菌剂的高效液相色谱图参见图B.1。
说明:
1---苯酚;
2---对氯间甲酚;
3---邻伞花烃-5-醇;
4---4-叔丁基苯酚;
5---2,4,6-三氯苯酚;
6---五氯苯酚。
图B.1 6种酚类抗菌剂的高效液相色谱图
附 录 C
(资料性附录)
确 证 试 验
C.1 液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:C18柱,1.7μm,150mm ×2.1mm(内径);
b) 流动相:5mmol乙酸铵水溶液+乙腈=60+40(体积比);
c) 流速:0.3mL/min;
d) 柱温:30℃;
e) 进样量:5μL。
C.2 质谱参考条件
质谱参考条件如下:
a) 离子源:电喷雾离子源(ESI);
b) 扫描方式:负离子扫描;
c) 电喷雾电压:-4500V;
d) 离子源温度:500℃;
e) 气帘气:氮气,0.207MPa;
f) 碰撞气:氮气,0.055MPa;
g) 检测方式:多反应监测(MRM)。
6种酚类抗菌剂的保留时间、定量离子对、定性离子对、去簇电压、碰撞电压参见表C.1。6种酚类
抗菌剂标准品溶液的提取离子色谱图参见图C.1。
表C.1 6种酚类抗菌剂的质谱 MRM模式优化参数
目标物 保留时间/min
定量离子对
(m/z)
定性离子对
(m/z)
去簇电压/V 碰撞电压/V
苯酚 2.37 93.0/65.0 93.0/93.0 -75.0 -5.0,-24.0
对氯间甲酚 5.10 141.0/105.0 141.0/114.0 -75.0 -50.0,-21.0
邻伞花烃-5-醇 8.20 149.1/133.0 149.1/117.0 -75.0 -63.0,-21.0
4-叔丁基苯酚 8.59 149.1/133.0 149.1/117.0 -7......
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