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| 标准编号 | GB/T 39927-2021 (GB/T39927-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | Determination of prohibited substances veratrine in cosmetics - High performance liquid chromatography | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | Y42 | | 字数估计 | 10,142 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 39927-2021
化妆品中禁用物质藜芦碱的测定 高效液相色谱法
Determination of prohibited substances veratrine in cosmetics -- High performance liquid chromatography
1 范围
本标准规定了化妆品中藜芦碱主要成分藜芦定的高效液相色谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器
和设备、试验步骤、结果计算、回收率和精密度、允许差等内容。
本标准适用于面贴膜、膏霜、乳、水类化妆品中藜芦定的测定。
本标准方法检出限为15mg/kg,定量限为50mg/kg。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
样品提取后,经高效液相色谱分离,根据保留时间定性,峰面积定量,外标法定量。必要时,采用液
相色谱-质谱法确证。
4 试剂和材料
除另有说明外,所用试剂均为分析纯。
4.1 水,GB/T 6682,一级。
4.2 甲醇:色谱纯。
4.3 盐酸:优级纯。
4.4 0.1mol/L盐酸溶液:量取盐酸(4.3)8.3mL加水至1L。
4.5 乙酸铵。
4.6 提取液:取0.1mol/L盐酸溶液(4.4)500mL,加入甲醇(4.2)混合均匀并定容至1L,经0.45μm
滤膜过滤。
4.7 藜芦定标准品:纯度不小于99.0%,藜芦定的英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量和结构式
参见附录A中表A.1。
4.8 藜芦定标准工作溶液:准确称取藜芦定标准品10mg(精确到0.0001g)于10.0mL的容量瓶中,
用提取液(4.6)溶解并定容制得质量浓度为1000mg/L的藜芦定标准储备液(冰箱-20℃保存1个
月)。用提取液(4.6)将藜芦定标准储备液逐级稀释配成质量浓度为2.0mg/L、5.0mg/L、10mg/L、
50mg/L和100mg/L的标准工作溶液,现用现配。
4.9 0.1mol/L乙酸铵:7.71g乙酸铵(4.5)溶解于1.0L水中。
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪,配有二极管阵列(DAD)检测器或者紫外检测器。
5.2 液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)仪:配有电喷雾离子源(ESI)。
5.3 分析天平,感量为0.0001g。
5.4 超声振荡器:工作频率53kHz。
5.5 离心机:转速≥8000r/min。
5.6 滤膜:孔径0.45μm,材质为聚四氟乙烯。
5.7 具塞比色管:10mL。
5.8 涡旋振荡器。
6 试验步骤
6.1 样品处理
对于面贴膜(取面膜液)、膏霜、乳、水类化妆品,称取样品约1g(精确至0.0001g)于10mL具塞比
色管中,用提取液(4.6)稀释至刻度,涡旋30s,超声提取10min,离心机8000r/min离心10min,取上
清液经0.45μm 滤膜过滤,滤液作为待测样液在色谱条件下进行测定。
6.2 测定条件
高效液相色谱测定参考条件如下:
a) 色谱柱:C18反相柱,250mm×4.6mm(粒径5μm),或其他性能相当者;
b) 流动相:甲醇(4.2)+0.1mol/L乙酸铵(4.9)=60+40(体积比);
c) 流速:1.0mL/min;
d) 柱温:40℃。
6.3 标准工作曲线绘制
按6.2色谱条件检测,分别吸取10μL藜芦定标准工作溶液(4.8)注入高效液相色谱仪,以色谱峰的
峰面积为纵坐标,对应的溶液浓度为横坐标,绘制标准工作曲线。
6.4 试样测定
按6.2的色谱条件,取6.1步骤中滤液进样,得到试样溶液的峰面积,根据保留时间和二极管阵列的
光谱图定性,藜芦定标准品的DAD光谱图参见图B.2。从标准曲线上查得试样溶液中藜芦定的含量。
试样溶液中藜芦定的响应值应在标准曲线线性范围内,超过线性范围则应稀释后测定。必要时,阳
性样品需用液相色谱-质谱进行确证试验(参见附录C)。
6.5 空白试验
除不称取试样外,均按6.1~6.4步骤进行。
6.6 平行试验
按6.1~6.4步骤,对同一样品进行平行试验测定。
7 结果计算
试样中藜芦定的含量按式(1)计算:
8 回收率和精密度
在添加浓度为50.0mg/kg~500.0mg/kg范围内,回收率在83.5%~112.2%之间,相对标准偏差
小于5%。
9 允许差
在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。
附 录 A
(资料性附录)
藜芦定标准物质的信息
藜芦定的英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量和结构式见表A.1。
附 录 B
(资料性附录)
藜芦定标准品HPLC色谱图和DAD光谱图
藜芦定标准品的HPLC色谱图和DAD光谱图分别见图B.1和图B.2。
附 录 C
(资料性附录)
确证试验
C.1 液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:C18,3.5μm,150mm×2.1mm(粒径3.5μm),或其他性能相当者;
b) 流动相:乙腈+0.1%甲酸水=50+50(体积比);
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