搜索结果: SN/T 4877.15-2019, SN/T4877.15-2019, SNT 4877.15-2019, SNT4877.15-2019
| 标准编号 | SN/T 4877.15-2019 (SN/T4877.15-2019) | | 中文名称 | 基因条形码筛查方法 第15部分：检疫性叶点霉 | | 英文名称 | (Gene barcode screening methods - Part 15: Phytophthora) | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C62 | | 国际标准分类 | | | 字数估计 | 12,113 | | 发布日期 | 2019-09-03 | | 实施日期 | 2020-03-01 | | 标准依据 | 海关总署公告2019年第142号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 4877.15-2019: 基因条形码筛查方法 第15部分：检疫性叶点霉
SN/T 4877.15-2019 英文名称: (Gene barcode screening methods - Part 15: Phytophthora)
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T４８７７．１５-２０１９
基因条形码筛查方法
第１５部分：检疫性叶点霉
中华人民共和国海关总署 发 布
前言
本部分依据GB/T １．１-２００９给出的规则起草。
本部分由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本部分起草单位：宁波检验检疫科学技术研究院、中华人民共和国宁波海关、中国科学院微生物研
究所、中国检验检疫科学研究院。
本部分主要起草人：段维军、蔡磊、郭立新、陈倩、段丽君、李雪莲、刘芳、赵文军、陈先锋。
SN／T４８７７．１５-２０１９
SN/T 4877《基因条形码筛查方法》分为15个部分：
- - 第 1 部 分 ： 检 疫 性 棒 形 杆 菌 ；
- - 第 2 部 分 ： 检 疫 性 黄 单 胞 菌 ；
- - 第 3 部 分 ： 检 疫 性 植 原 体 ；
- - 第 4 部 分 ： 检 疫 性 茎 点 霉 ；
- - 第 5 部 分 ： 检 疫 性 拟 茎 点 霉 ；
- - 第 6 部 分 ： 检 疫 性 嗜 酸 菌 ；
- - 第 7 部 分 ： 检 疫 性 轮 枝 菌 ；
- - 第 8 部 分 ： 检 疫 性 炭 疽 菌 ；
- - 第 9 部 分 ： 检 疫 性 腥 黑 粉 菌 ；
- - 第 1 0 部 分 ： 检 疫 性 疫 霉 ；
- - 第 1 1 部 分 ： 检 疫 性 异 株 苋 亚 属 ；
- - 第 1 2 部 分 ： 黄 瓜 绿 斑 驳 花 叶 病 毒 ；
- - 第 1 3 部 分 ： 检 疫 性 马 铃 薯 Y 病 毒 属 病 毒 ；
- - 第 1 4 部 分 ： 检 疫 性 南 方 菜 豆 花 叶 病 毒 属 病 毒 ；
- - 第 1 5 部 分 ： 检 疫 性 叶 点 霉 。
本 部 分 为 SN/T 4877的 第 1 5 部 分 。
基因条形码筛查方法
第１５部分：检疫性叶点霉
１ 范围
本部分规定了检疫性叶点霉ＤＮＡ条形码筛查方法。
本部分适用于进境植物及其产品中检疫性叶点霉的筛查。
２ 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
ＳＮ/T ２５８９ 植物病原真菌检测规范
３ 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
３．１ 检疫性叶点霉属真菌
凭证标本是一种为鉴定或研究提供实物依据并具有足够存档信息（采集及鉴定信息等）而长期保存
的标本，它可以是完整的生物个体或其一部分，也可以是生物体的遗传物质。凭证标本的保存需要有详
细的标本编号、存放地点等详细信息，以便于日后查证。
ＤＮＡ条形码是指生物体内能够代表该物种的，标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的ＤＮＡ
片段。研究人员用ＤＮＡ条形码技术鉴定物种及物种间亲缘关系，修改已有的分类学结论等。
用于鉴定检疫性叶点霉属的ＤＮＡ条形码如下：
４ 方法原理
根据叶点霉属真菌的核糖体转录间隔区（ＩＴＳ）的序列特征，应用ＤＮＡ条形码技术对检疫性叶点霉
进行种类筛查，确定目标真菌是否为检疫性叶点霉及其种属归类。
５ 仪器用具和试剂
５．１ 仪器设备与用具
显微镜、高压灭菌锅、超净工作台、组织破碎仪、恒温水浴锅、台式冷冻离心机、微量分光光度仪、电
子天平、超纯水仪、漩涡振荡器、冰箱、微量移液器（０．５μＬ，２．５μＬ，１０μＬ，２０μＬ，２００μＬ，１０００μＬ）、常规ＰＣＲ仪、核酸电泳仪、凝胶成像系统、ＤＮＡ提取仪。
５．２ 主要试剂
购置如下试剂或者相应的真菌基因组提取试剂盒：乙二胺四乙酸钠盐（Ｎａ２ＥＤＴＡ·２Ｈ２Ｏ）、氢氧
化钠（ＮａＯＨ）、Ｔｒｉｓ碱、浓盐酸（ＨＣｌ）、溴化十六烷基三甲铵（ＣＴＡＢ）、氯化钠（ＮａＣｌ）、聚乙烯吡咯烷酮
（ＰＶＰ）、冰醋酸（ＣＨ３ＣＯＯＨ）、蒸馏水、氯仿（ＣＨＣｌ３）、异戊醇、７０％乙醇。
ＰＣＲ和电泳检测所需试剂：１０×ＰＣＲ缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸（ｄＮＴＰｓ）、ＥｘＴａｑ聚合酶、引
物、超纯水、ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ、琼脂糖、ＧｅｌＲｅｄ核酸凝胶染料。
６ 筛查鉴定方法
６．１ 样品的采集与处理
样品的采集、分离、纯化和培养参照ＳＮ/T ２５８９植物病原真菌检疫鉴定方法进行。
６．２ 核酸的制备
采用基因组提取试剂盒制备ＤＮＡ，或采用改良的ＣＴＡＢ提取法，参见附录Ａ。
６．３ DNA纯度与浓度的测定
用微量紫外分光光度计测定ＤＮＡ的纯度与浓度，分别取得２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处的吸收值，计算核
酸的纯度和浓度，计算公式如下：
６．４ 序列扩增测序
利用通用引物对ＩＴＳ基因进行扩增测序（具体步骤见附录Ｂ），将序列在Ｇｅｎｂａｎｋ数据库或中国检
疫性有害生物ＤＮＡ条形码数据库中进行比对，若与数据库中叶点霉属ＩＴＳ基因序列相似性均大于
９８％，则比对分析序列同源性。
７ 结果判定
ＩＴＳ基因序列长度大于５００ｂｐ，在ＮＣＢＩ数据库或中国检疫性有害生物ＤＮＡ条形码数据库中进行
比对分析，若与数据库中叶点霉属ＩＴＳ基因序列（参见附录Ｃ）同源性大于９８％，则判定该菌为叶点
霉属。
若测定序列与附录Ｄ检疫性叶点霉ＩＴＳ参考序列同源性为１００％，则判定该菌为葡萄苦腐病菌。
８ 保......
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