SN/T 5223-2019 相关标准英文版PDF

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SN/T 5223-2019	英文版	265	SN/T 5223-2019	3分钟内自动发货[PDF]	蜂蜜中18种游离氨基酸的测定高效液相色谱-荧光检测法	SN/T 5223-2019	有效

基本信息
标准编号	SN/T 5223-2019 (SN/T5223-2019)
中文名称	蜂蜜中18种游离氨基酸的测定高效液相色谱-荧光检测法
英文名称	Determination of 18 free amino acids in honey -- HPLC-FLD method
行业	商检行业标准 (推荐)
中标分类	C53
国际标准分类	67.050
字数估计	8,870
发布日期	2019
实施日期	2020-07-01
发布机构	海关总署

SN/T 5223-2019: 蜂蜜中18种游离氨基酸的测定高效液相色谱-荧光检测法 SN/T 5223-2019 英文名称: Determination of 18 free amino acids in honey -- HPLC-FLD method 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准蜂蜜中 18 种游离氨基酸的测定高效液相色谱 - 荧光检测法中华人民共和国海关总署发布前言本标准按照 GB/T 1.1- 2009 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：陈辉、彭涛、代汉慧、胡雪艳、谢瑜杰、范春林。蜂蜜中 18 种游离氨基酸的测定高效液相色谱 - 荧光检测法 1 范围本标准规定了蜂蜜中 18 种游离氨基酸的高效液相色谱 - 荧光检测方法。本标准适用于蜂蜜天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、丝氨酸（Ser）、谷氨酰胺（Gln）、组氨酸（His）、甘氨酸（Gly）、苏氨酸（Thr）、精氨酸（Arg）、丙氨酸（Ala）、酪氨酸（Tys）、缬氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、色氨酸（Trp）、苯丙氨酸（Phe）、异亮氨酸（Ileu）、亮氨酸（Leu）、赖氨酸（Lys）、脯氨酸（Pro）的测定。 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 方法提要采用定量环衍生的方法对蜂蜜中氨基酸进行衍生化处理，再用高效液相色谱 - 荧光检测法进行测定，外标法定量。 4 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）。 4.2 氢氧化钠（NaOH）。 4.3 硼酸（BH3O3）。 4.4 乙腈（色谱纯）。 4.5 甲醇（色谱纯）。 4.6 浓盐酸。 4.7 邻苯二甲醛试剂（OPA）：10 mg/mL。 4.8 9- 芴甲基氯甲酸酯试剂（FMOC）：2.5mg/mL。 4.9 氢氧化钠溶液（10mol/L）：称取 40 g 氢氧化钠（4.2），溶于 50 mL 水中，冷却至室温后，用水稀释至 100 mL，混匀。 4.10 0.1 mol/L 盐酸溶液：取 0.90 mL 浓盐酸（4.6）至 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。 4.11 硼酸盐缓冲液：称取 2.47 g 硼酸（4.3）于 100 mL 水中，用氢氧化钠溶液（4.9）调节 pH 值至 10.2。 4.12 磷酸二氢钠缓冲溶液：称取 6.24 g 磷酸二氢钠（4.1），转移到 1 000 mL 玻璃烧杯中。加入 1 000 mL 超纯水，搅拌，直到所有晶体完全溶解。用氢氧化钠溶液（4.9）调节溶液 pH 值至 7.80。 4.13 18 种单个氨基酸标准品（具体名称参见附录 A）：固体，纯度不小于 98%。 4.14 混合氨基酸标准储备溶液：准确称取一定量的各种氨基酸标准品，用 0.1 mol/L 盐酸溶液（4.10）溶解，混匀，使其浓度为 500 pmol/μL。 4.15 混合氨基酸标准工作溶液：准确量取混合氨基酸标准储备溶液（4.14），用 0.1 mol/L 盐酸溶液（4.10）稀释，依次配制成浓度分别为 0.5 pmol/μL、1 pmol/μL、2.5 pmol/μL、5 pmol/μL、10 pmol/μL、25 pmol/μL 的标准溶液。 4.16 微孔滤膜：孔径 0.22 μm。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱仪：配有荧光检测器。 5.2 磁力搅拌器。 5.3 分析天平：感量为 0.1 mg 和 0.001 g。 5.4 pH 计。 6 测定步骤 6.1 样品准备称取 3.0 g（精确至 0.01 g）蜂蜜样品，用适量超纯水涡旋混匀至溶解，然后用超纯水定容至 25 mL， 0.22 μm 滤膜过滤，上机检测。 6.2 测定 6.2.1 液相色谱参考条件 6.2.1.1 色谱柱：氨基酸分析柱，150 mm×4.6 mm （内径），3.5 μm 或相当者； 6.2.1.2 柱温：40℃ ； 6.2.1.3 自动进样器：定量环规格为 100 μL。 6.2.1.4 进样器程序：参见附录 B。 6.2.1.5 流动相 A 为磷酸二氢钠缓冲溶液（4.12）。流动相 B 为乙腈 : 甲醇 : 水 =45 : 45 : 10（v/v/v）。流动相、流速及梯度洗脱条件见表 1。 6.2.1.6 FLD 参数： -- 0 min，激发波长 =340 nm ；发射波长 =450 nm ；PTM gain=10 ； -- 15 min，激发波长 =266 nm ；发射波长 =305 nm ；PTM gain=9。 6.3 定性依据氨基酸标准样品的保留时间，对待测样品中各氨基酸进行定性，定性色谱图参见附录 C。 ......

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