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| 标准编号 | GB 28404-2012 (GB28404-2012) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 保健食品中α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定 | | 英文名称 | National food safety standards in health food α-linolenic acid, eicosapentaenoic acid, docosapentaenoic acid and 22 carbon 60-acid determination | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C54;X40 | | 国际标准分类 | 67.220.20 | | 字数估计 | 10,199 | | 标准依据 | 卫生部公告2012年第9号; | | 发布机构 | 中华人民共和国卫生部 | | 范围 | 本标准规定了保健食品中α-亚麻酸、二十碳五烯酸(简称EPA, 下同)、二十二碳五烯酸(简称DPA, 下同)和二十二碳六烯酸(简称DHA, 下同)的气相色谱测定方法。本标准适用于保健品食品中α-亚麻酸、EPA, DPA, DHA的测定, 不适用于以脂肪酸乙酯为有效成分的保健食品中α-亚麻酸、EPA, DPA, DHA的测定。 | GB 28404-2012: 食品安全国家标准 保健食品中α-亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定
GB 28404-2012 英文名称: National food safety standards in health food α-linolenic acid, eicosapentaenoic acid, docosapentaenoic acid and 22 carbon 60-acid determination
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
保健食品中α-亚麻酸、二十碳五烯酸、
二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定
1 范围
本标准规定了保健食品中α-亚麻酸、二十碳五烯酸(简称 EPA,下同)、二十二碳五烯酸(简称
DPA,下同)和二十二碳六烯酸(简称DHA,下同)的气相色谱测定方法。
本标准适用于保健品食品中α-亚麻酸、EPA、DPA、DHA的测定,不适用于以脂肪酸乙酯为有效成
分的保健食品中α-亚麻酸、EPA、DPA、DHA的测定。
2 原理
试样经酸水解后提取脂肪,其中α-亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)、二十二
碳六烯酸(DHA)经酯交换生成甲酯后,通过气相色谱分离检测,以保留时间定性,外标法定量。
3 试剂和材料
注:除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 氢氧化钾(KOH)。
3.1.2 盐酸(HCl)。
3.1.3 无水乙醚(C2H5OC2H5)。
3.1.4 乙醇(CH3CH2OH):体积分数≥95%。
3.1.5 石油醚:沸程30℃~60℃。
3.1.6 正己烷[CH3(CH2)4CH3]:色谱纯。
3.1.7 甲醇(CH3OH):色谱纯。
3.1.8 无水硫酸钠(Na2SO4)。
3.2 试剂配制
氢氧化钾甲醇溶液(0.5mol/L):称取2.8g氢氧化钾,用甲醇溶解并定容至100mL,混匀。
3.3 标准品
3.3.1 α-亚麻酸甲酯(C19H32O2):纯度≥99.0%。
3.3.2 EPA甲酯(C21H32O2):纯度≥98.5%。
3.3.3 DPA甲酯(C23H36O2):纯度≥98.0%。
3.3.4 DHA甲酯(C23H34O2):纯度≥98.5%。
3.4 标准溶液的配制
3.4.1 单个脂肪酸甲酯标准储备液(4.0mg/mL):称取100.0mgα-亚麻酸甲酯、EPA 甲酯、DPA甲
酯、DHA甲酯标准物质于25.0mL容量瓶中,分别用正己烷溶解并定容至刻度,摇匀。
此溶液应贮存于-18℃冰箱中。
3.4.2 脂肪酸甲酯混合标准中间液(1.0mg/mL):分别吸取脂肪酸甲酯标准储备液2.50mL于10.0mL
容量瓶中,摇匀,亦为标准曲线最高浓度,临用时配制。
3.4.3 脂肪酸甲酯标准工作液:分别吸取脂肪酸甲酯中间液0.40mL、0.80mL、1.0mL、2.0mL、
4.0mL于10.0mL容量瓶中,用正己烷定容,此浓度即为0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.10mg/mL、
0.20mg/mL、0.40mg/mL的标准工作液,临用时配制。
4 仪器与设备
4.1 气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(FID)。
4.2 天平:感量为1mg和0.1mg。
4.3 旋转蒸发仪。
4.4 离心机:转速≥4000r/min。
4.5 涡旋混合器。
4.6 恒温水浴锅。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 试样处理
5.1.1.1 固体试样
称取已粉碎混合均匀的待测试样0.5g~2g(精确到0.001g)(含待测组分5mg/g~10mg/g)加
入50mL比色管中,加8mL水,混匀后再加10mL盐酸。将比色管放入70℃~80℃水浴中,每隔
5min~10min以涡旋混合器混合一次,至试样水解完全为止,约需40min~50min。取出比色管,加
入10mL乙醇,混合。冷却至室温后将混合物移入100mL具塞量筒中,以25mL无水乙醚分次洗比
色管,一并倒入量筒中。密塞振摇1min。加入25mL石油醚,密塞振摇1min,静置30min,分层,将
吸出的有机层经过无水硫酸钠(约5g)滤入浓缩瓶中。再加入25mL无水乙醚密塞振摇1min,25mL
石油醚,密塞振摇1min,静置、分层,将吸出的有机层经过无水硫酸钠(约5g)滤入浓缩瓶中。按“再加
入25mL无水乙醚,静置、分层,将吸出的有机层经过无水硫酸钠(约5g)滤入浓缩瓶中”重复操作
一次,将全部提取液用旋转蒸发仪于45℃减压浓缩至近干。用正己烷少量多次溶解浓缩物,转移至
25mL容量瓶并定容,摇匀。按5.1.2步骤甲酯化处理。
5.1.1.2 油类制品
称取混合均匀的油类制品0.2g~1g(精确到0.001g)(含待测组分10mg/g~20mg/g)至25mL
容量瓶中,加入5mL正己烷轻摇溶解,并用正己烷定容至刻度,摇匀。按5.1.2步骤甲酯化处理,脂肪
酸乙酯型油类制品的物理鉴别参见附录A。
5.1.2 甲酯化
吸取待测液(5.1.1.1,5.1.1.2)2.0mL至10mL具塞刻度试管中,加入2.0mL氢氧化钾甲醇溶
液,立即移至涡旋混合器上振荡混合5min,静置5min,加入6mL蒸馏水,上下振摇0.5min,静置分
层后,吸取下层液体,弃去后再反复用少量蒸馏水进行洗涤,并用吸管弃去水层,直至洗至中性(若有机
相有乳化现象,以4000r/min离心10min),吸取正己烷层待上机测试用。
注:如使用塑料离心管或塑料刻度试管进行试样处理须同步进行空白对照试验。
5.2 气相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱:键合交联聚乙二醇固定相,柱长30m,内径0.32mm,膜厚0.5μm或同等性能的色谱柱。
5.2.2 柱温箱温度:起始温度180℃,10℃/min升温至220℃,再以8℃/min升温至250℃,保持13min。
5.2.3 进样口温度:250℃;进样量1μL,分流比20∶1。
5.2.4 FID检测器温度:270℃。
5.2.5 载气:高纯氮气,流量1.0mL/min,尾吹25mL/min。
5.2.6 氢气:40mL/min;空气:450mL/min。
5.3 标准曲线的制作
将1μL的标准系列各浓度溶液(3.4.2,3.4.3),注入气相色谱仪中,测得相应的峰面积或峰高,以
标准工作液的浓度为横坐标,以峰面积或峰高为纵坐标,绘制标准曲线(标准溶液气相色谱图见附录B中图B.1)。
5.4 试验溶液的测定
将1μL的试样待测液(5.1.2)注入气相色谱仪中,以保留时间定性,测得峰面积或峰高,根据标准
曲线得到待测液中各脂肪酸甲酯的组分浓度(样品溶液气相色谱图见附录B中图B.2)。
6 分析结果的表述
试样中α-亚麻酸、EPA、DPA、DHA含量按式(1)计算
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。
8 其他
当试样量为0.5g,定容体积为25mL,各脂肪酸的定量限分别为
α-亚麻酸0.010g/100g,EPA0.018g/100g,DPA0.024g/100g,DHA0.018g/100g。
附 录 A
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