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GB 4789.29-2020

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GB 4789.29-2020 英文版 265 GB 4789.29-2020 3分钟内自动发货[PDF],有增值税发票。 食品安全国家标准 食品微生物学检验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)检验 GB 4789.29-2020 有效

   
基本信息
标准编号 GB 4789.29-2020 (GB4789.29-2020)
中文名称 食品安全国家标准 食品微生物学检验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)检验
英文名称 National food safety standard - Food microbiological examination - Burkholderia gladioli
行业 国家标准
中标分类 X09
字数估计 20,223
发布日期 2020-09-11
实施日期 2021-03-11
旧标准 (被替代) GB/T 4789.29-2003
标准依据 国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局公告2020年第7号

PDF样品: GB 4789.29-2020
English: GB 4789.29-2020
GB 4789.29-2020
National food safety standard - Food microbiological examination - Burkholderia gladioli
书中华人民共和国国家标准
GB 4789.29-2020
食品安全国家标准
食品微生物学检验
唐菖蒲伯克霍尔德氏菌
(椰毒假单胞菌酵米面亚种)检验
2020-09-11发布
2021-03-11实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
书GB 4789.29-2020
前言
本标准代替GB/T 4789.29-2003《食品卫生微生物学检验 椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》。
本标准与GB/T 4789.29-2003相比,主要变化如下:
---标准名称修改为“食品安全国家标准 食品微生物学检验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单
胞菌酵米面亚种)检验”;
---修改了范围;
---修改了设备和材料;
---修改了培养基和试剂;
---修改了检验程序;
---增加了结果报告;
---增加了附录A。
GB 4789.29-2020
食品安全国家标准
食品微生物学检验
唐菖蒲伯克霍尔德氏菌
(椰毒假单胞菌酵米面亚种)检验
1 范围
2 设备和材料
2.1 实验室常规灭菌设备。
2.2 冰箱:2℃~8℃、-20℃~-30℃。
2.3 恒温培养箱:26℃±1℃、36℃±1℃。
2.4 恒温水浴锅:46℃±1℃。
2.5 显微镜:10倍~100倍。
2.6 均质器。
2.7 离心机:3000r/min。
2.8 电子天平:感量0.1g。
2.9 比浊计。
2.10 锥形瓶:容量100mL、500mL。
2.11 无菌培养皿:直径90mm、直径150mm。
2.12 无菌透明玻璃纸、滤纸。
2.13 无菌灌胃器:1mL。
2.14 微生物生化鉴定系统。
2.15 小鼠:18g~20g,每一批次试验应使用同一品系的KM或ICR小鼠。
3 培养基和试剂
3.1 GVC增菌液:见A.1。
3.2 改良马铃薯葡萄糖琼脂(mPDA):见A.2。
3.3 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA):见A.2.1。
3.4 PCFA培养基:见A.3。
3.5 马铃薯葡萄糖半固体琼脂:见A.4。
3.6 卵黄琼脂:见A.5。
3.7 革兰氏染色液:见A.6。
3.8 氧化酶试剂:见A.7。
GB 4789.29-2020
5.7 毒性试验
5.7.1 产毒培养
将初步鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)的菌株接种PDA平板,36℃±1
℃,培养24h±2h,用灭菌接种环刮取适量菌苔,加到3mL无菌生理盐水的试管中,配成1麦氏浓度
(McFarland,MCF)的菌悬液(约为108CFU/mL),用无菌吸管吸取0.5mL,滴在铺好无菌玻璃纸的直径150mm马铃薯葡萄糖半固体平板上,用无菌L棒涂布均匀,26℃±1℃培养5d。取下带菌的玻璃纸,将半固体平板置于100℃流动蒸汽灭菌30min。室温冷却后,置-20℃~-30℃冰箱过夜。将冰冻好的半固体平板置室温融化,用无菌吸管吸出冻融液,经滤纸过滤至无菌试管或锥形瓶中(此为毒素
粗提液),4℃避光保存。同时,将未接种菌苔、铺好无菌玻璃纸的直径150mm马铃薯葡萄糖半固体平板作为阴性对照,按照同样的试验方法制备阴性对照粗提液,4℃避光保存。
5.7.2 毒力测定
取毒素粗提液或经100℃水浴蒸发后的5倍~10倍浓缩液,灌胃小鼠3只,每只0.5mL,观察至
7d。若菌株产生米酵菌酸,小鼠在灌胃后20min~24h内发病。主要症状为竖毛、萎糜不振、躁动,继而行步蹒跚、肢体麻痹、瘫软、抽搐,呈角弓反张状,呼吸急促、死亡。
取阴性对照粗提液或经100℃水浴蒸发后的5倍~10倍浓缩液,灌胃小鼠3只,每只0.5mL,观察至7d。小鼠应健康存活。
5.7.3 米酵菌酸测定
毒力测定实验阳性时,分别取毒素粗提液,阴性对照粗提液,按照GB 5009.189执行。
6 结果报告
生化试验符合且毒性试验阳性,报告检出唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种);生化
试验和毒性试验有一项不符合,报告未检出唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(椰毒假单胞菌酵米面亚种)。
GB 4789.29-2020
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红色。
A.20 精氨酸试验
A.20.1 成分
A.20.2 制法
除L-精氨酸以外的成分加热溶解后,每瓶分装100mL,加入L-精氨酸0.5g(0.5%),校正pH 至
6.8±0.2。对照培养基不加L-精氨酸。每管分装0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压10min。
A.20.3 试验方法
挑取琼脂培养物接种,36℃±1℃培养18h~24h。精氨酸脱羧酶阳性者因产碱,培养基呈紫色。
阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管呈黄色。
A.21 硝酸盐培养基
A.21.1 成分
A.21.2 制法
溶解后,校正pH,分装,每管5mL,121℃高压15min。
A.21.3 硝酸盐还原试剂
B.21.3.1 甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
B.21.3.2 乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
A.21.4 试验方法
接种后于36℃±1℃,培养1d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时立
刻或数分钟内显红色。
注:本试验阴性的原因有三:①细菌不能还原硝酸盐;②亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;③培养基不适于细菌的生
长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
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A.22 石蕊牛乳试验
A.22.1 成分
新鲜脱脂牛乳 100mL
2%石蕊水溶液 100mL
A.22.2 制法
将新鲜牛乳隔水煮沸30min,置于冰箱内一夜。3000r/min,离心40min。拨开乳脂,用吸管吸出
下层乳汁于另一烧瓶内,加入石蕊溶液,分装于试管内,112.6℃高压15min。
A.22.3 试验方法
挑取培养物接种,37℃培养18h~24h。
A.22.4 结果
牛乳中含有丰富的糖类及蛋白质,其中主要是乳糖和酪蛋白,一般细菌均能在其中生长。由于各种
细菌对这些物质的分......
   
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