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中国标准英文版 数据库收录: 159759 更新: 2023-03-09

标准号码	内文	价格美元	第2步(购买)	交付天数	标准名称	相关标准	状态
GB 4789.29-2020	英文版	265	GB 4789.29-2020	3分钟内自动发货[PDF]，有增值税发票。	食品安全国家标准 食品微生物学检验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验	GB 4789.29-2020	有效

基本信息
标准编号	GB 4789.29-2020 (GB4789.29-2020)
中文名称	食品安全国家标准 食品微生物学检验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验
英文名称	National food safety standard - Food microbiological examination - Burkholderia gladioli
行业	国家标准
中标分类	X09
字数估计	20,223
发布日期	2020-09-11
实施日期	2021-03-11
旧标准 (被替代)	GB/T 4789.29-2003
标准依据	国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局公告2020年第7号

GB 4789.29-2020
National food safety standard - Food microbiological examination - Burkholderia gladioli
书中华人民共和国国家标准
GB ４７８９．２９-２０２０
食品安全国家标准
食品微生物学检验
唐菖蒲伯克霍尔德氏菌
（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验
２０２０-０９-１１发布
２０２１-０３-１１实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
书GB ４７８９．２９-２０２０
前言
本标准代替GB/T ４７８９．２９-２００３《食品卫生微生物学检验　椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》。
本标准与GB/T ４７８９．２９-２００３相比，主要变化如下：
---标准名称修改为“食品安全国家标准　食品微生物学检验　唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单
胞菌酵米面亚种）检验”；
---修改了范围；
---修改了设备和材料；
---修改了培养基和试剂；
---修改了检验程序；
---增加了结果报告；
---增加了附录Ａ。
GB ４７８９．２９-２０２０
食品安全国家标准
食品微生物学检验
唐菖蒲伯克霍尔德氏菌
（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验
１　范围
２　设备和材料
２．１　实验室常规灭菌设备。
２．２　冰箱：２℃～８℃、-２０℃～-３０℃。
２．３　恒温培养箱：２６℃±１℃、３６℃±１℃。
２．４　恒温水浴锅：４６℃±１℃。
２．５　显微镜：１０倍～１００倍。
２．６　均质器。
２．７　离心机：３０００ｒ／ｍｉｎ。
２．８　电子天平：感量０．１ｇ。
２．９　比浊计。
２．１０　锥形瓶：容量１００ｍＬ、５００ｍＬ。
２．１１　无菌培养皿：直径９０ｍｍ、直径１５０ｍｍ。
２．１２　无菌透明玻璃纸、滤纸。
２．１３　无菌灌胃器：１ｍＬ。
２．１４　微生物生化鉴定系统。
２．１５　小鼠：１８ｇ～２０ｇ，每一批次试验应使用同一品系的ＫＭ或ＩＣＲ小鼠。
３　培养基和试剂
３．１　ＧＶＣ增菌液：见Ａ．１。
３．２　改良马铃薯葡萄糖琼脂（ｍＰＤＡ）：见Ａ．２。
３．３　马铃薯葡萄糖琼脂（ＰＤＡ）：见Ａ．２．１。
３．４　ＰＣＦＡ培养基：见Ａ．３。
３．５　马铃薯葡萄糖半固体琼脂：见Ａ．４。
３．６　卵黄琼脂：见Ａ．５。
３．７　革兰氏染色液：见Ａ．６。
３．８　氧化酶试剂：见Ａ．７。
GB ４７８９．２９-２０２０
５．７　毒性试验
５．７．１　产毒培养
将初步鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）的菌株接种ＰＤＡ平板，３６℃±１
℃，培养２４ｈ±２ｈ，用灭菌接种环刮取适量菌苔，加到３ｍＬ无菌生理盐水的试管中，配成１麦氏浓度
（ＭｃＦａｒｌａｎｄ，ＭＣＦ）的菌悬液（约为１０８ＣＦＵ／ｍＬ），用无菌吸管吸取０．５ｍＬ，滴在铺好无菌玻璃纸的直径１５０ｍｍ马铃薯葡萄糖半固体平板上，用无菌Ｌ棒涂布均匀，２６℃±１℃培养５ｄ。取下带菌的玻璃纸，将半固体平板置于１００℃流动蒸汽灭菌３０ｍｉｎ。室温冷却后，置-２０℃～-３０℃冰箱过夜。将冰冻好的半固体平板置室温融化，用无菌吸管吸出冻融液，经滤纸过滤至无菌试管或锥形瓶中（此为毒素
粗提液），４℃避光保存。同时，将未接种菌苔、铺好无菌玻璃纸的直径１５０ｍｍ马铃薯葡萄糖半固体平板作为阴性对照，按照同样的试验方法制备阴性对照粗提液，４℃避光保存。
５．７．２　毒力测定
取毒素粗提液或经１００℃水浴蒸发后的５倍～１０倍浓缩液，灌胃小鼠３只，每只０．５ｍＬ，观察至
７ｄ。若菌株产生米酵菌酸，小鼠在灌胃后２０ｍｉｎ～２４ｈ内发病。主要症状为竖毛、萎糜不振、躁动，继而行步蹒跚、肢体麻痹、瘫软、抽搐，呈角弓反张状，呼吸急促、死亡。
取阴性对照粗提液或经１００℃水浴蒸发后的５倍～１０倍浓缩液，灌胃小鼠３只，每只０．５ｍＬ，观察至７ｄ。小鼠应健康存活。
５．７．３　米酵菌酸测定
毒力测定实验阳性时，分别取毒素粗提液，阴性对照粗提液，按照GB ５００９．１８９执行。
６　结果报告
生化试验符合且毒性试验阳性，报告检出唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）；生化
试验和毒性试验有一项不符合，报告未检出唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）。
GB ４７８９．２９-２０２０
１６
红色。
A．２０　精氨酸试验
A．２０．１　成分
A．２０．２　制法
除Ｌ-精氨酸以外的成分加热溶解后，每瓶分装１００ｍＬ，加入Ｌ-精氨酸０．５ｇ（０．５％），校正ｐＨ 至
６．８±０．２。对照培养基不加Ｌ-精氨酸。每管分装０．５ｍＬ，上面滴加一层液体石蜡，１１５℃高压１０ｍｉｎ。
A．２０．３　试验方法
挑取琼脂培养物接种，３６℃±１℃培养１８ｈ～２４ｈ。精氨酸脱羧酶阳性者因产碱，培养基呈紫色。
阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管呈黄色。
A．２１　硝酸盐培养基
A．２１．１　成分
A．２１．２　制法
溶解后，校正ｐＨ，分装，每管５ｍＬ，１２１℃高压１５ｍｉｎ。
A．２１．３　硝酸盐还原试剂
B．２１．３．１　甲液：将对氨基苯磺酸０．８ｇ溶解于２．５ｍｏｌ／Ｌ乙酸溶液１００ｍＬ中。
B．２１．３．２　乙液：将甲萘胺０．５ｇ溶解于２．５ｍｏｌ／Ｌ乙酸溶液１００ｍＬ中。
A．２１．４　试验方法
接种后于３６℃±１℃，培养１ｄ，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时立
刻或数分钟内显红色。
注：本试验阴性的原因有三：①细菌不能还原硝酸盐；②亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；③培养基不适于细菌的生
长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
GB ４７８９．２９-２０２０
１７
A．２２　石蕊牛乳试验
A．２２．１　成分
新鲜脱脂牛乳 １００ｍＬ
２％石蕊水溶液 １００ｍＬ
A．２２．２　制法
将新鲜牛乳隔水煮沸３０ｍｉｎ，置于冰箱内一夜。３０００ｒ／ｍｉｎ，离心４０ｍｉｎ。拨开乳脂，用吸管吸出
下层乳汁于另一烧瓶内，加入石蕊溶液，分装于试管内，１１２．６℃高压１５ｍｉｎ。
A．２２．３　试验方法
挑取培养物接种，３７℃培养１８ｈ～２４ｈ。
A．２２．４　结果
牛乳中含有丰富的糖类及蛋白质，其中主要是乳糖和酪蛋白，一般细菌均能在其中生长。由于各种
细菌对这些物质的分......