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GB 4789.29-2020 English:
GB 4789.29-2020 GB 4789.29-2020
National food safety standard - Food microbiological examination - Burkholderia gladioli
书中华人民共和国国家标准
GB ４７８９．２９-２０２０
食品安全国家标准
食品微生物学检验
唐菖蒲伯克霍尔德氏菌
（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验
２０２０-０９-１１发布
２０２１-０３-１１实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
书GB ４７８９．２９-２０２０
前言
本标准代替GB/T ４７８９．２９-２００３《食品卫生微生物学检验 椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》。
本标准与GB/T ４７８９．２９-２００３相比，主要变化如下：
---标准名称修改为“食品安全国家标准 食品微生物学检验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单
胞菌酵米面亚种）检验”；
---修改了范围；
---修改了设备和材料；
---修改了培养基和试剂；
---修改了检验程序；
---增加了结果报告；
---增加了附录Ａ。
GB ４７８９．２９-２０２０
食品安全国家标准
食品微生物学检验
唐菖蒲伯克霍尔德氏菌
（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验
１ 范围
２ 设备和材料
２．１ 实验室常规灭菌设备。
２．２ 冰箱：２℃～８℃、-２０℃～-３０℃。
２．３ 恒温培养箱：２６℃±１℃、３６℃±１℃。
２．４ 恒温水浴锅：４６℃±１℃。
２．５ 显微镜：１０倍～１００倍。
２．６ 均质器。
２．７ 离心机：３０００ｒ／ｍｉｎ。
２．８ 电子天平：感量０．１ｇ。
２．９ 比浊计。
２．１０ 锥形瓶：容量１００ｍＬ、５００ｍＬ。
２．１１ 无菌培养皿：直径９０ｍｍ、直径１５０ｍｍ。
２．１２ 无菌透明玻璃纸、滤纸。
２．１３ 无菌灌胃器：１ｍＬ。
２．１４ 微生物生化鉴定系统。
２．１５ 小鼠：１８ｇ～２０ｇ，每一批次试验应使用同一品系的ＫＭ或ＩＣＲ小鼠。
３ 培养基和试剂
３．１ ＧＶＣ增菌液：见Ａ．１。
３．２ 改良马铃薯葡萄糖琼脂（ｍＰＤＡ）：见Ａ．２。
３．３ 马铃薯葡萄糖琼脂（ＰＤＡ）：见Ａ．２．１。
３．４ ＰＣＦＡ培养基：见Ａ．３。
３．５ 马铃薯葡萄糖半固体琼脂：见Ａ．４。
３．６ 卵黄琼脂：见Ａ．５。
３．７ 革兰氏染色液：见Ａ．６。
３．８ 氧化酶试剂：见Ａ．７。
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５．７ 毒性试验
５．７．１ 产毒培养
将初步鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）的菌株接种ＰＤＡ平板，３６℃±１
℃，培养２４ｈ±２ｈ，用灭菌接种环刮取适量菌苔，加到３ｍＬ无菌生理盐水的试管中，配成１麦氏浓度
（ＭｃＦａｒｌａｎｄ，ＭＣＦ）的菌悬液（约为１０８ＣＦＵ／ｍＬ），用无菌吸管吸取０．５ｍＬ，滴在铺好无菌玻璃纸的直径１５０ｍｍ马铃薯葡萄糖半固体平板上，用无菌Ｌ棒涂布均匀，２６℃±１℃培养５ｄ。取下带菌的玻璃纸，将半固体平板置于１００℃流动蒸汽灭菌３０ｍｉｎ。室温冷却后，置-２０℃～-３０℃冰箱过夜。将冰冻好的半固体平板置室温融化，用无菌吸管吸出冻融液，经滤纸过滤至无菌试管或锥形瓶中（此为毒素
粗提液），４℃避光保存。同时，将未接种菌苔、铺好无菌玻璃纸的直径１５０ｍｍ马铃薯葡萄糖半固体平板作为阴性对照，按照同样的试验方法制备阴性对照粗提液，４℃避光保存。
５．７．２ 毒力测定
取毒素粗提液或经１００℃水浴蒸发后的５倍～１０倍浓缩液，灌胃小鼠３只，每只０．５ｍＬ，观察至
７ｄ。若菌株产生米酵菌酸，小鼠在灌胃后２０ｍｉｎ～２４ｈ内发病。主要症状为竖毛、萎糜不振、躁动，继而行步蹒跚、肢体麻痹、瘫软、抽搐，呈角弓反张状，呼吸急促、死亡。
取阴性对照粗提液或经１００℃水浴蒸发后的５倍～１０倍浓缩液，灌胃小鼠３只，每只０．５ｍＬ，观察至７ｄ。小鼠应健康存活。
５．７．３ 米酵菌酸测定
毒力测定实验阳性时，分别取毒素粗提液，阴性对照粗提液，按照GB ５００９．１８９执行。
６ 结果报告
生化试验符合且毒性试验阳性，报告检出唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）；生化
试验和毒性试验有一项不符合，报告未检出唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）。
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红色。
A．２０ 精氨酸试验
A．２０．１ 成分
A．２０．２ 制法
除Ｌ-精氨酸以外的成分加热溶解后，每瓶分装１００ｍＬ，加入Ｌ-精氨酸０．５ｇ（０．５％），校正ｐＨ 至
６．８±０．２。对照培养基不加Ｌ-精氨酸。每管分装０．５ｍＬ，上面滴加一层液体石蜡，１１５℃高压１０ｍｉｎ。
A．２０．３ 试验方法
挑取琼脂培养物接种，３６℃±１℃培养１８ｈ～２４ｈ。精氨酸脱羧酶阳性者因产碱，培养基呈紫色。
阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管呈黄色。
A．２１ 硝酸盐培养基
A．２１．１ 成分
A．２１．２ 制法
溶解后，校正ｐＨ，分装，每管５ｍＬ，１２１℃高压１５ｍｉｎ。
A．２１．３ 硝酸盐还原试剂
B．２１．３．１ 甲液：将对氨基苯磺酸０．８ｇ溶解于２．５ｍｏｌ／Ｌ乙酸溶液１００ｍＬ中。
B．２１．３．２ 乙液：将甲萘胺０．５ｇ溶解于２．５ｍｏｌ／Ｌ乙酸溶液１００ｍＬ中。
A．２１．４ 试验方法
接种后于３６℃±１℃，培养１ｄ，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时立
刻或数分钟内显红色。
注：本试验阴性的原因有三：①细菌不能还原硝酸盐；②亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；③培养基不适于细菌的生
长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
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A．２２ 石蕊牛乳试验
A．２２．１ 成分
新鲜脱脂牛乳 １００ｍＬ
２％石蕊水溶液 １００ｍＬ
A．２２．２ 制法
将新鲜牛乳隔水煮沸３０ｍｉｎ，置于冰箱内一夜。３０００ｒ／ｍｉｎ，离心４０ｍｉｎ。拨开乳脂，用吸管吸出
下层乳汁于另一烧瓶内，加入石蕊溶液，分装于试管内，１１２．６℃高压１５ｍｉｎ。
A．２２．３ 试验方法
挑取培养物接种，３７℃培养１８ｈ～２４ｈ。
A．２２．４ 结果
牛乳中含有丰富的糖类及蛋白质，其中主要是乳糖和酪蛋白，一般细菌均能在其中生长。由于各种
细菌对这些物质的分......