中国标准英文版 数据库收录: 159759 更新: 2024-06-21

[PDF] GB 5009.285-2022 - 自动发货, 英文版

标准搜索结果: 'GB 5009.285-2022'
标准号码内文价格美元第2步(购买)交付天数标准名称状态
GB 5009.285-2022 英文版 290 GB 5009.285-2022 3分钟内自动发货[PDF],有增值税发票。 食品安全国家标准 食品中维生素B12的测定 有效

基本信息
标准编号 GB 5009.285-2022 (GB5009.285-2022)
中文名称 食品安全国家标准 食品中维生素B12的测定
英文名称 National food safety standard - Determination of Vitamin B12 in foods
行业 国家标准
中标分类 X09
字数估计 20,271
发布日期 2022-06-30
实施日期 2022-12-30
旧标准 (被替代) GB 5413.14-2010
归口单位 国家健康卫生委员会
发布机构 国家市场监督管理总局

GB 5009.285-2022: 食品安全国家标准 食品中维生素B12的测定
GB 5009.285-2022 英文名称: National food safety standard - Determination of Vitamin B12 in foods
1 范围
本标准规定了食品中维生素B12的测定方法。
第一法液相色谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品中维生素B12的测定。
第二法液相色谱-质谱法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品、肉及肉制品、即食谷物、烘焙食品、果冻、
饮料中维生素B12的测定。
第三法微生物法适用于婴幼儿食品、乳及乳制品中维生素B12的测定。
第一法 液相色谱法
2 原理
试样经酶解后,用氰化钾(或氰化钠)溶液将钴胺素异构体(羟钴胺素、甲钴胺素和5-脱氧腺苷钴胺
素等)转化为氰钴胺素。样液通过免疫亲和柱净化、浓缩后,反相液相色谱柱分离,紫外检测器检测,外
标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 无水乙酸钠(CH3COONa)。
3.1.2 乙酸(CH3COOH)。
3.1.3 甲醇(CH3OH):色谱级。
3.1.4 乙腈(CH3CN):色谱级。
3.1.5 三氟乙酸(CF3COOH):色谱级。
3.1.6 氰化钾或氰化钠(KCN/NaCN)。
3.1.7 胃蛋白酶(CAS号:9001-75-6,活力≥400U/mg)。
3.1.8 淀粉酶(活力≥50U/mg)。
3.1.9 乙醇(C2H6O)。
3.2 试剂配制
3.2.1 乙醇溶液(25%):量取250mL乙醇,加水稀释至1000mL,混匀。
3.2.2 乙酸钠缓冲液(0.25mol/L):称取20.5g无水乙酸钠,用950mL水溶解并用乙酸调pH至4.0±0.1,用水稀释至1000mL。
3.2.3 氰化钾(或氰化钠)溶液(10mg/mL):称取1.0g氰化钾(或氰化钠)固体,加适量水溶解,并用水
稀释至100mL。
注:氰化钾(或氰化钠)为剧毒化学品;操作者须带防护用具,在通风橱内进行氰化钾(或氰化钠)溶液的配制或
使用。
3.2.4 三氟乙酸溶液(0.04%,体积比):量取500mL水,加入200μL三氟乙酸,混匀。
3.3 标准品
维生素B12(氰钴胺素)标准品(C63H88CoN14O14P,CAS号:68-19-9):纯度≥99%,或经国家认证并
授予标准物质证书的标准品。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 维生素B12标准储备液(1mg/mL):称取10mg(精确至0.01mg)维生素B12标准品于50mL烧杯中,用乙醇溶液溶解后,转移至10mL容量瓶中,用乙醇溶液定容至刻度,摇匀,转移至棕色试剂瓶,
于-20℃下避光保存,有效期6个月。
3.4.2 维生素B12标准工作液(10μg/mL):吸取1.00mL维生素B12标准储备液,置于100mL容量瓶中,用乙醇溶液定容至刻度。转移至棕色试剂瓶中,于4℃下避光保存,有效期1个月。
3.4.3 维生素B12标准系列工作溶液:准确吸取标准工作液30μL、60μL、90μL、150μL和200μL,分别置于10 mL 容量瓶中,用水定容至刻度。其浓度分别为:30ng/mL、60ng/mL、90ng/mL、
150ng/mL和200ng/mL。临用现配。
3.5 材料
3.5.1 维生素B12免疫亲和柱,柱容量≥800ng,柱回收率≥85%(验证方法参见附录A)。
3.5.2 玻璃纤维滤纸。
3.5.3 微孔滤膜:水相,0.22μm。
4 仪器和设备
4.1 液相色谱仪:带紫外检测器。
4.2 天平:感量为0.01g、0.001g和0.00001g。
4.3 pH 计:精度0.01。
4.4 水浴恒温振荡器:温度范围25℃~100℃。
4.5 超声波清洗器。
4.6 离心机:转速≥10000r/min。
5 分析步骤
注:操作过程应避免紫外光照,并尽可能避光操作。
5.1 样品前处理
5.1.1 试样制备
固体样品粉碎、研磨,或用绞肉机制成食糜,均质混匀。液体样品试验前振摇混匀。
5.1.2 样品提取
称取5g~10g试样(精确至0.01g)于150mL具塞锥形瓶中,依次加入30mL乙酸钠缓冲液、
0.2g胃蛋白酶、0.05g淀粉酶和2mL氰化钾(或氰化钠)溶液,充分混合。将样品溶液放入水浴恒温振荡器,在37℃,酶解30min(肉类样品酶解10h~16h),酶解后转入100℃水浴中,保持30min,取出
冷却至室温。将样品溶液转移至100mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀。移取上述溶液40mL至
50mL离心管中,在10000r/min下离心10min,取上清液用玻璃纤维滤纸过滤后备用。
注:对于以氰钴铵素为营养强化剂,且本底中不含有其他形式钴胺素的样品,在样品提取时可不使用氰化钾(或氰
化钠)。
5.1.3 净化
将免疫亲和柱连接至固相萃取装置上,弃去免疫亲和柱内的缓冲液后,移取适量上述滤液(其中含
维生素B12为10ng~500ng)过柱,调节过柱速度为2mL/min~3mL/min。待样液完全过柱后,用
10mL水以稳定流速淋洗免疫亲和柱,抽干。在免疫亲和柱下放置10mL玻璃试管,用3mL甲醇分
3次洗脱,收集全部洗脱液,在60℃以下用氮气流缓缓吹至近干,用0.04%三氟乙酸溶液定容至
1.0mL,涡旋30s溶解残留物,0.22μm滤膜过滤,待测。注:氰化钾(或氰化钠)废液严禁与酸混合,可加入氢氧化钠调节pH>10,再加入高锰酸钾粉末(按废液质量的3%
加入),使氰化物分解,放置24h后排放。
5.2 液相色谱参考条件
5.2.1 色谱柱:C18柱(柱长150mm,柱内径4.6mm,填料粒径2.5μm),或相当者。5.2.2 流动相:A相,0.04%三氟乙酸溶液;B相,乙腈。
5.2.3 梯度洗脱:0min~6.0min,90% A;6.0min~8.5min,90%~0% A;8.5min~14.0min,90% A。
5.2.4 流速:0.8mL/min。
5.2.5 柱温:40℃。
5.2.6 进样体积:100μL。5.2.7 检测波长:361nm。
5.3 标准曲线的制作
将标准系列溶液由低浓度到高浓度依次注入液相色谱仪中,测定相应的色谱峰面积,以维生素B12的峰面积为纵坐标,以维生素B12的浓度为横坐标绘制标准曲线。液相色谱图见附录B中图B.1。
5.4 样品测定
将待测样液注入液相色谱仪中,得到待测溶液中维生素B12的峰面积,根据标准曲线得到测定液中维生素B12的浓度。待测样液中维生素B12的响应值应在标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应稀释上机溶液,或调整取样量重新按样品分析步骤处理后再进样分析。
5.5 空白试验
不称取试样,按样品分析步骤操作,应不含有干扰待测组分的物质。
6 分析结果的表述
试样中维生素B12(以氰钴胺素计)的含量按式(1)计算:
计算结果保留两位有效数字。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。
8 其他
当取样量为5.00g时,婴幼儿食品和乳品、肉与肉制品的检出限为0.2μg/100g,定量限为0.5μg/100g。
第二法 液相色谱-质谱法
9 原理
试样经酶解后,用氰化钾(或氰化钠)溶液将钴胺素异构体(羟钴胺素、甲钴胺素和5-脱氧腺苷钴胺
素等)转化为氰钴胺素。样液通过免疫亲和柱净化、浓缩后,反相液相色谱柱分离,串联质谱检测,同位
素内标法定量。
10 试剂和材料
除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
10.1 试剂
10.1.1 无水乙酸钠(CH3COONa)。
10.1.2 氢氧化钠(NaOH)。
10.1.3 乙酸(CH3COOH)。
10.1.4 乙腈(CH3CN):色谱纯。
10.1.5 乙酸铵(CH3COONH4):色谱纯。
10.1.6 氰化钾或氰化钠(KCN/NaCN)。
10.1.7 胃蛋白酶(CAS号:9001-75-6,活力≥400U/mg)。
10.1.8 淀粉酶(活力≥50U/mg)。
10.1.9 乙醇(C2H6O)。
10.2 试剂配制
10.2.1 乙醇溶液(25%):量取250mL乙醇,加水稀释至1000mL,混匀。
10.2.2 乙酸钠缓冲液(0.25mol/L):称取20.5g无水乙酸钠,用950mL水溶解并用乙酸调pH至4.0
±0.1,用水稀释至1000mL。
10.2.3 氰化钾(或氰化钠)溶液(10mg/mL):称取1.0g氰化钾(或氰化钠)固体,加适量水溶解,并用
水稀释至100mL。
注:氰化钾(或氰化钠)为剧毒化学品,操作者须带防护用具,在通风橱内进行氰化钾(或氰化钠)溶液的配制或
使用。
10.2.4 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取4.0g氢氧化钠,加适量水溶解,并用水稀释至100mL。
10.2.5 乙酸铵溶液(2.5mmol/L):称取0.19g乙酸铵,加适量水溶解,并用水稀释至1000mL。
10.2.6 乙腈溶液(90%,体积比):量取100mL水加于900mL乙腈中,混匀,超声脱气。
10.3 标准品
10.3.1 维生素B12(氰钴胺素)标准品(C63H88CoN14O14P,CAS号:68-19-9):纯度≥99%,或经国家认
证并授予标准物质证书的标准品。
10.3.2 维生素B12同位素内标溶液(13C7-C63H88CoN14O14P):1μg/mL甲醇溶液。
10.4 标准溶液配制
10.4.1 维生素B12标准储备溶液(1mg/mL):称取10mg(精确至0.01mg)维生素B12标准品于50mL
烧杯中,用乙醇溶液溶解后,转移至10mL容量瓶中,用乙醇溶液定容至刻度,摇匀,转移至棕色试剂
瓶,于-20℃下避光保存,有效期6个月。
10.4.2 维生素B12标准中间溶液(10μg/mL):吸取1.00mL维生素B12标准储备溶液,置于100mL容量瓶中,用乙醇溶液定容至刻度。转移至棕色试剂瓶中,于4℃下避光保存,有效期1个月。
10.4.3 维生素B12标准工作溶液(0.2μg/mL):吸取1.00mL维生素B12标准中间溶液,置于50mL容量瓶中,用水定容至刻度。转移至棕色试剂瓶中,于4℃下避光保存,有效期一周。
10.4.4 维生素 B12同位素内标工作液(50ng/mL):吸取0.5mL 维生素 B12同位素内标溶液
(1μg/mL),置于10mL容量瓶中,用水定容至刻度。转移至棕色试剂瓶中,于4℃下避光保存。10.4.5 标准系列溶液:分别准确移取0.2μg/mL的维生素B12标准工作溶液10μL、25μL、50μL、125μL、250μL和500μL于1mL容量瓶中,各加入100μL同位素内标工作液(50ng/mL),用水定容至刻度,摇匀。其中,维生素B12的浓度分别为2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL和
100ng/mL。维生素B12同位素内标的浓度为5ng/mL。临用现配。
10.5 材料
10.5.1 维生素B12免疫亲和柱,柱容量≥800ng,柱回收率≥85%(验证方法参见附录A)。
10.5.2 玻璃纤维滤纸。
10.5.3 微孔滤膜:水相,0.22μm。
11 仪器和设备
11.1 液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾电离源(ESI)。
11.2 天平:感量为0.01g、0.001g和0.00001g。
11.3 pH计:精度0.01。
11.4 水浴恒温振荡器:温度范围25℃~100℃。
11.5 超声波清洗器。
11.6 离心机:转速≥10000r/min。
12 分析步骤
注:操作过程应避免紫外光照射,并尽可能避光操作。
12.1 样品前处理
12.1.1 试样制备
固体样品需粉碎、研磨,或用绞肉机制成食糜,均质混匀。液体样品测定前振摇混匀。
12.1.2 提取
12.1.2.1 婴幼儿食品和乳品、肉与肉制品、烘焙食品、即食谷物
称取混匀后的试样1g~5g(精确至0.01g)于50mL离心管中,依次加入100μL同位素内标工作液、25mL乙酸钠缓冲液、0.04g胃蛋白酶、0.01g淀粉酶和2mL氰化钾(或氰化钠)溶液,充分混合。
将样品溶液放入水浴恒温振荡器,在37℃下,振荡酶解30min(肉类样品需酶解10h~16h),酶解后转
入100℃水浴中,保持30min,取出冷却至室温。在10000r/min下离心10min,取上清液用玻璃纤维
滤纸过滤后备用。
12.1.2.2 饮料
称取混匀后的试样25g(精确至0.01g)于50mL离心管中,加入100μL同位素内标工作液,用氢氧化钠溶液调pH至5~7(碳酸饮料需在超声波振荡器......
   
       隐私   ·  优质产品   ·  退款政策   ·  公平交易   ·  关于我们
宁德梧三商贸有限公司 (营业执照期限:2019-2049年. 纳税人识别号:91350900MA32WE2Q2X)
对公账号开户银行:中国建设银行 | 账户名称:宁德梧三商贸有限公司 | 账户号码:35050168730700000955
本公司专职于中国国家标准行业标准英文版