| 标准编号 | GB 31656.12-2021 (GB31656.12-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of Penicillin multi-residues in aquatic products by liquid chromatography-tandem mass spectrometry method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 9,919 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31656.12-2021: 食品安全国家标准 水产品中青霉素类药物多残留的测定 液相色谱-串联质谱法
食品安全国家标准
水产品中青霉素类药物多残留的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
代替 GB/T 22952-2008
１ 范围
本文件规定了水产品中青霉素类药物残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.
本文件适用于鱼、虾、鳖和海参等水产品可食组织中阿莫西林、氨苄西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西
林、氯唑西林、双氯西林、萘夫西林、哌拉西林、阿洛西林和甲氧西林单个或多个药物残留量的测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T ３０８９１-２０１４ 水产品抽样规范
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的青霉素类药物,用乙腈水溶液提取,固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱测定,内标法
定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１２ 甲酸(HCOOH):色谱纯.
５２ 溶液配制
５２１ ３０％乙腈水溶液:取乙腈３０mL、水７０mL,混合.
５２２ ８０％乙腈水溶液:取乙腈４００mL、水１００mL,混合.
５２３ ００５％甲酸水溶液:取甲酸２５０μL,加水稀释至５００mL.
５２４ ００５％甲酸乙腈溶液:取甲酸２５０μL,加乙腈稀释至５００mL.
５３ 标准品
５３１ 青霉素类药物:阿莫西林、氨苄西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、萘夫西
林、哌拉西林、阿洛西林和甲氧西林,含量均≥９５％,具体内容见附录A.
５３２ 内标:阿莫西林Ｇd４、氨苄西林Ｇd５、青霉素GＧd７、萘夫西林Ｇd６,含量均≥９５％,具体内容见附录A.
５４ 标准溶液制备
５４１ 青霉素标准储备液(０１０mg/mL):取青霉素类药物标准品约１０mg,精密称定,用３０％乙腈水
溶液溶解并稀释定容至１００mL,配制成浓度均为０１０mg/mL的标准储备液.-１８℃避光保存,有效
期５d.
５４２ 内标储备液(０１０mg/mL):取内标标准品约１０mg,精密称定,用３０％乙腈水溶液溶解并稀释定
GB ３１６５６１２-２０２１
容至１００mL,配制成浓度均为０１０mg/mL的内标储备液.-１８℃避光保存,有效期５d.
５４３ 混合标准中间液(１０μg/mL):分别精密量取青霉素标准储备液适量,用水稀释制成阿莫西林、氨
苄西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、萘夫西林、哌拉西林、阿洛西林和甲氧西林浓
度均为１０μg/mL的混合标准溶液.-４℃避光保存,有效期５d.
５４４ 内标工作液(１０μg/mL):分别精密量取内标储备液适量,用水稀释制成阿莫西林Ｇd４、氨苄西林Ｇ
d５、青霉素GＧd７、萘夫西林Ｇd６ 浓度均为１０μg/mL的内标工作液.-４℃避光保存,有效期５d.
５５ 材料
５５１ 通过式反相混合型亲水亲脂固相萃取柱:２００mg/６mL,或相当者.
５５２ 超滤管:１０kD,０５mL.
６ 仪器与设备
６１ 液相色谱Ｇ串联四极杆质谱仪:配电喷雾离子源.
６２ 分析天平:感量００１g和０００００１g.
６３ 高速冷冻离心机.
６４ 固相萃取装置.
６５ 超声波清洗仪.
６６ 组织匀浆机.
６７ 涡旋混合器.
６８ 氮吹仪.
７ 试料的制备与保存
７１ 试料的制备
按GB/T ３０８９１-２０１４附录B的要求制样.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７２ 试料的保存
-１８℃以下保存,３个月内进行分析检测.
８ 测定步骤
８１ 提取
取试料２５g(准确至±００２g),加内标工作液１００μL,静置１０min,加８０％乙腈水溶液５mL,涡旋
混合１min,超声１０min,４℃１００００r/min离心５min,取上清液,残渣加８０％乙腈水溶液４mL重复提
取一次,合并上清液,用８０％乙腈水溶液稀释至１００mL,备用.
８２ 净化
取８０％乙腈水溶液约１mL润洗固相萃取柱,弃去流出液,取备用液２０mL过柱,保持流速为１滴/s,
收集流出液,３５℃氮气吹至少于０５mL,加水定容至０５mL,用超滤管以１２０００r/min离心１０min,取滤
液,供液相色谱Ｇ串联质谱测定.
８３ 标准曲线的制备
精密量取混合标准中间液、内标工作液适量,用水配制成青霉素类药物浓度为２μg/L、５μg/L、
１０μg/L、２５μg/L、５０μg/L、１５０μg/L和３００μg/L的混合标准工作液,其中青霉素内标溶液浓度均为
４０μg/L.以测得特征离子质量色谱峰外标和内标峰面积比值为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,
绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.
８４ 测定
８４１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８色谱柱(２１mm×１００mm,２６μm),或性能相当者;
b) 柱温:３５℃;
c) 流速:０４mL/min;
d) 进样量:１０μL;
e) 流动相:A为００５％的甲酸水溶液,B为００５％的甲酸乙腈溶液.梯度洗脱条件见表１.
８４２ 质谱参考条件
a) 离子化模式:电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM),正离子模式;
b) 喷雾电压:５５kV;
c) 气帘气压力:０２４MPa;
d) 碰撞气压力:００２MPa;
e) 离子源温度:５００℃;
f) 碰撞室入口电压:１０V;
g) 碰撞室出口电压:１２V;
h) 驻留时间:５０ms;
i) 离子源Gas１:０３４MPa;
j) 离子源Gas２:０３４MPa;
k) 多反应监测母离子、子离子、解簇电压和碰撞能量见表２.
８５ 测定法
８５１ 定性测定
在同样测试条件下,试料溶液中青霉素类药物的保留时间与标准工作液中青霉素类药物的保留时间
之比,偏差在±２５％以内,且检测到的相对离子丰度,应与浓度相当的标准溶液相对丰度一致.其允许偏
差应符合表３的要求.
８５２ 定量测定
取试料溶液和混合标准工作溶液等体积进样测定,作单点或多点校准,以色谱峰面积定量,按内标法
计算,其中阿莫西林以阿莫西林Ｇd４ 为内标,氨苄西林以氨苄西林Ｇd５ 为内标,青霉素G、青霉素V、苯唑西
林、氯唑西林和双氯西林以青霉素GＧd７ 为内标,萘夫西林、哌拉西林、阿洛西林和甲氧西林以萘夫西林Ｇd６
为内标.标准溶液及试料溶液中青霉素类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围内.在上述液相色
谱Ｇ质谱条件下,标准溶液中特征离子质量色谱图见附录B.
８６ 空白试验
取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和表述
试料中青霉素类药物的残留量按标准曲线或公式(１)计算.
１０ 检测方法的灵敏度、准确度和精密度
１０１ 灵敏度
本方法的检出限:氨苄西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、萘夫西林、哌拉西
林、阿洛西林、甲氧西林均为２μg/kg,阿莫西林为１０μg/kg.
本方法的定量限:氨苄西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、萘夫西林、哌拉西
林、阿洛西林、甲氧西林均为５μ......
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