| 标准编号 | GB 31656.13-2021 (GB31656.13-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | (National Food Safety Standard Determination of Multi-residue Nitrofuran Metabolites in Aquatic Products Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 8,853 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31656.13-2021: 食品安全国家标准 水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定 液相色谱-串联质谱法
食品安全国家标准
水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定
液相色谱Ｇ串联质谱法
１ 范围
本文件规定了水产品中硝基呋喃类代谢物３Ｇ氨基Ｇ２Ｇ 唑烷基酮(３ＧaminoＧ２Ｇoxazolidinone,AOZ)、５Ｇ
吗啉甲基Ｇ３Ｇ氨基Ｇ２Ｇ 唑烷基酮(５ＧmorpholinomethylＧ３ＧaminoＧ２Ｇoxazolidinone,AMOZ)、１Ｇ氨基Ｇ２Ｇ内酰脲
(１Ｇaminohydantoin,AHD)和氨基脲(semicarbazide,SEM)残留量的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.
本文件适用于鱼、海参及鳖等水产品可食组织中硝基呋喃类代谢物AOZ、AMOZ、AHD和SEM 残
留量的测定,以及虾和蟹等甲壳类可食组织中AOZ、AMOZ和AHD的测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅
该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T ３０８９１-２０１４ 水产品抽样规范
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的硝基呋喃类蛋白结合态代谢物在酸性条件下水解,经２Ｇ硝基苯甲醛衍生化,用乙酸乙
酯液液萃取,高速离心净化,液相色谱Ｇ串联质谱测定,内标法定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
5.1 试剂
5.1.1甲醇(CH₃OH):色谱纯。
5.1.2乙酸铵(CH₃COONH₄)色谱纯。
5.1.3乙酸乙酯(C₄H₈O₂):色谱纯。
5.1.4二甲亚砜[(CH₃)₂SO]:色谱纯。
5.1.5 2-硝基苯甲醛(C₇H₅NO₃):色谱纯。
5.1.6无水磷酸氢二钾(K₂HPO)。
5.1.7盐酸(HCD。
5.2 溶液配制
5.2.1 0.5 mol/L盐酸溶液：取盐酸42mL,用水稀释至1000mL,混匀。
5.2.20.002 mol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵0.15g,用水溶解并稀释至1000mL,混匀。
5.2.30.05 mol/L 2-硝基苯甲醛溶液：取2-硝基苯甲醛0.076 g,用二甲亚砜溶解并稀释至10mL,混匀，现用现配。
5.2.41.0 mol/L磷酸氢二钾溶液：取无水磷酸氢二钾87.1 g,用水溶解并稀释至500mL,混匀。
5.2.55%甲醇溶液：取甲醇5mL,用水稀释至100mL,混匀。
5.3标准品
5.3.1 硝基呋喃类代谢物：AOZ、AMOZ、AHD·HCl和SEM·HCl,含量均≥99.0%,具体内容见附录A。
5.3.2内标：AOZ-D₄、AMOZ-D、AHD-³C₃和SEM·HCl-³C,15N2,含量均≥99.0%,具体内容见附
录A。
5.4标准溶液配制
5.4.1 标准储备液：取AOZ、AMOZ、AHD·HCl、SEM·HC1标准品各适量(相当于活性成分10 mg),精密称定，加甲醇适量使溶解并定容至10mL棕色容量瓶，配制成浓度为1.0 mg/mL标准储备液。-18℃避光保存，有效期6个月。
5.4.2混合标准中间液：分别准确量取标准储备液适量，用甲醇逐级稀释，配制成浓度为1.0μg/mL混合标准中间液。2℃～8℃避光保存，有效期1个月。
5.4.3混合标准工作液：分别准确量取混合标准中间液各1mL于10mL和100mL棕色容量瓶，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为100μg/L和10μg/L混合标准工作液。现用现配。
5.4.4同位素内标标准储备液：取AOZ-D₄、AMOZ-D₅、AHD-³C₃和SEM·HCI-³C,⁵N₂标准品各适量(相当于活性成分10mg),精密称定，加甲醇适量使溶解并稀释定容至10mL棕色容量瓶，配制成浓度为
1.0 mg/mL内标标准储备液。-18℃避光保存，有效期6个月。
5.4.5混合内标标准工作液：分别准确量取同位素内标标准储备液适量，用甲醇逐级稀释，配制成浓度为100μg/L混合内标标准工作液。-18℃避光保存，有效期3个月。
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源。
6.2分析天平：感量0.01g和0.00001g。
6.3离心机：6000 r/min。
6.4 高速离心机：14000 r/min。
6.5涡旋混合器。
6.6 恒温振荡器。
6.7 氮吹仪。
7试料的制备与保存
7.1 试料的制备
按GB/T 30891-2014附录B的要求制样。
a) 取均质的供试料品，作为供试试料；
b) 取均质的空白样品，作为空白试料；
c) 取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。
7.2试料的保存
-18℃以下保存。
8 测定步骤
8.1 水解与衍生化
取试料2g(精确至±0.01g),于50mL聚丙烯离心管中，准确加入混合内标标准工作液50μL,涡旋混合1 min,加盐酸溶液5mL、2-硝基苯甲醛溶液0.15 mL,涡旋混合1 min,置于恒温振荡器中，37℃避光振荡16 h。
8.2提取净化
取出离心管冷却至室温，用磷酸氢二钾溶液调pH至7.0～7.5,加乙酸乙酯8mL,涡旋振荡30 s,6000 r/min离心5min,取上清液至10mL玻璃离心管，40℃氮气吹干。加5%甲醇溶液1.0 mL溶解残留物，再将溶液转移至1.5mL离心管中，以14000r/min的转速离心10 min,取清液过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱分析。
8.3标准曲线的制备
分别准确移取10μg/L和100μg/L混合标准工作液各0.05 mL、0.1mL、0.2mL于6个50 mL离心管中，除不加试料外，按7.1和7.2步骤操作，使最终浓度分别为0.5μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L
5.0μg/L、10μg/L、20μg/L,按7.4测定。以测得特征离子质量色谱峰外标和内标峰面积比值为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。
8.4 测定
8.4.1 液相色谱参考条件
a) 色谱柱：Cis色谱柱(100mm×2.1 mm,3.5μm),或相当者。
b) 柱温：35℃;
c)进样量：10μL;
d) 流速：0.35 mL/min;
e) 流动相：A为0.002 mol/L乙酸铵溶液，B为甲醇。梯度洗脱条件见表1。8.4.2 质谱参考条件
a) 离子源：电喷雾离子源；
b) 扫描方式：正离子扫描；
c) 检测方式：多反应离子监测(MRM);
d) 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；
e)喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度；
D) 监测离子参数情况见表2。
8.5测定法
8.5.1 定性测定
在同样测试条件下，试料溶液中硝基呋喃类代谢物的保留时间与标准溶液中硝基呋喃类代谢物的保留时间之比，偏差在土2.5%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3的要求。
8.5.2 定量测定
取试料溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，以色谱峰面积定量，按内标法计算，标准溶液及试料溶液中的硝基呋喃类代谢物响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述液相色谱-质谱条件下，硝基呋喃类代谢物标准溶液的液相色谱-质谱图见附录B。
8.6 空白试验
取空白试料，除不加标准溶液外，采用相同的测定步骤进行平行操作。
9结果计算和表述
试料中硝基呋喃类代谢物的残留量按......
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