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GB 5009.245-2016 英文版 130 GB 5009.245-2016 3分钟内自动发货[PDF] 食品安全国家标准 食品中聚葡萄糖的测定 GB 5009.245-2016 有效
   
基本信息
标准编号 GB 5009.245-2016 (GB5009.245-2016)
中文名称 食品安全国家标准 食品中聚葡萄糖的测定
英文名称 Food safety national standard -- Determination of polydextrose in foods
行业 国家标准
中标分类 X09
字数估计 13,159
发布日期 2016-08-31
实施日期 2017-03-01
标准依据 国家卫生和计划生育委员会公告2016年第11号

GB 5009.245-2016: 食品安全国家标准 食品中聚葡萄糖的测定 GB 5009.245-2016 英文名称: Food safety national standard -- Determination of polydextrose in foods 中华人民共和国国家标准 1 范围 本标准规定了食品中聚葡萄糖的测定方法。 本标准适用于食品中添加的聚葡萄糖的测定。 5 仪器与设备 5.1 分析天平:感量分别为1mg,0.1mg。 5.2 恒温水浴箱:控温精度±1℃。 5.3 高速离心机:转速≥10000r/min。 5.4 涡旋振荡器。 5.5 微量可调移液器:20μL~200μL、200μL~1000μL。 5.6 针筒式过滤器:孔径0.22μm。 5.7 超滤离心设备:100000Da分子截留,聚醚砜膜,0.5mL容积。 5.8 磁力搅拌器:带搅拌子。 5.9 离子色谱仪:配备脉冲安培检测器、梯度泵。 6 操作步骤 6.1 试样处理 6.1.1 固体试样:研磨、粉碎,分析前密闭保存,避免水分变化。 6.1.2 液体试样:测定前需混合摇匀。 6.2 聚葡萄糖提取 6.2.1 固体试样:取100mL具塞试样瓶,加入1粒磁力搅拌子,盖上螺口塞,称量(精确至0.001g),记 为m1。准确称取一定量试样(约含聚葡萄糖0.05g,精确至0.0001g,记为m2)至试样瓶中,加100mL 预热至80℃的水,磁力搅拌30s,80℃水浴10min,每5min磁力搅拌30s。取出试样瓶冷却至室温 后称量(精确至0.001g),记为m3。 6.2.2 液体试样(饮料、液态奶等):取100mL具塞试样瓶,称量(精确至0.001g),记为m1。准确吸取 一定量试样(约含聚葡萄糖0.05g,精确至0.0001g,记为m2)至试样瓶中,加100mL水,振荡混合均 匀,称量(精确至0.001g),记为m3。 6.2.3 适量吸取样液至2.0mL的离心管中,10000r/min离心15min,取上清液过0.22μm滤膜,取 0.45mL滤液加入1.5mL带有分子截留膜的离心管中,于10000r/min超滤离心30min。注意观察 是否离心完全及离心液的澄清度,如截留膜上方留有样液或离心液混浊,可加大转速、延长离心时间,或增加稀释倍数(F)。 6.3 酶解 6.3.1 取2mL离心管,称量(精确至0.0001g),记为m4。 6.3.2 吸取0.2mL超滤离心液加入离心管中,称量(精确至0.0001g),记为m5;加入酶混合液 0.8mL,称量(精确至0.0001g),记为m6;振荡混合均匀,于50℃水浴60min,沸水浴10min,取出, 冰浴5min,于10000r/min离心10min。上清液过0.2μm滤膜,进样分析。上清液需在72h内检测。 6.4 色谱参考条件 检测条件见附录B。 7 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 8 其他 最小称样量为5g时,固体试样检出限为0.2mg/100g,定量限为0.5mg/100g;液体试样为检出 限为0.15mg/100g,定量限为0.5mg/100g。 附 录 A 酶活性测定 A.1 果聚糖酶酶活力测定方法 A.1.1 原理 在pH4.5,温度40℃,底物(蔗果三糖)浓度为10mmol/L的标准条件下,1min释放1μmol果糖所需的酶量为1U。 A.1.2 试剂和溶剂 A.1.2.1 乙酸(0.2mol/L):准确吸取12mL冰乙酸,用水稀释至1000mL。 A.1.2.2 乙酸钠溶液(0.2mol/L):准确称取27.2g三水合乙酸钠,用水溶解并稀释至1000mL。 A.1.2.3 乙酸盐缓冲液(pH为4.5):将280mL乙酸溶液(0.2mol/L)与220mL乙酸钠溶液(0.2mol/L) 混合,用水稀释至1000mL。 A.1.2.4 氢氧化钠溶液(2mol/L):准确称取80g氢氧化钠,用水溶解并稀释至1000mL。 A.1.2.5 3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS):将6.3g3,5-二硝基水杨酸试剂和262mL2mol/LNaOH溶 液,加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g苯酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后 加蒸馏水定容至1000mL,贮于棕色瓶中备用。 A.1.2.6 果糖标准液(1mg/mL):准确称取80℃烘至恒重的分析纯果糖100mg,置于小烧杯中,加少 量乙酸盐缓冲液溶解后,转移到100mL容量瓶中,用乙酸盐缓冲液定容至100mL,混匀,4℃冰箱中保存备用。 A.1.2.7 蔗果三糖溶液(10mmol/L):精确称取5.04g蔗果三糖,用乙酸盐缓冲液溶解并稀释至1000mL。 A.1.3 仪器 A.1.3.1 分析天平。 A.1.3.2 电热恒温水浴锅。 A.1.3.3 可见光分光光度计。 A.1.3.4 计时器。 A.1.4 分析步骤 A.1.4.1 果糖标准曲线的绘制 吸取乙酸盐缓冲液4.0mL至25mL刻度试管中,加入DNS试剂5.0mL,沸水浴加入5min,冷却 至室温,用水定容至25mL,制成标准空白样。 分别吸取果糖标准液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL、7.00mL于100mL 容量瓶中,用乙酸盐缓冲液定容至100mL,配制成浓度0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.30mg/mL、 0.40mg/mL、0.50mg/mL、0.60mg/mL、0.70mg/mL果糖标准使用液,吸取果糖标准使用液各 2.0mL,分别加入到25mL刻度试管中,再分别加入2.0mL乙酸盐缓冲液和5.0mLDNS试剂。将各 管摇匀,在沸水浴中准确加热5min,取出,冷却至室温,加水定容至25mL,加塞后颠倒混匀,放置 30min,以标准空白液为对照调零,在540nm处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标,果糖含量(mg)为横坐标,绘制标准曲线。 A.1.4.2 待测酶溶液的配制 称取测试酶样品,用乙酸盐缓冲液进行稀释、定容(稀释后的酶液中果聚糖酶活力在0.04U/mL~0.08U/mL之间)。 A.1.4.3 测定步骤 吸取10.0mL蔗果三糖溶液,40℃平衡20min。 吸取10.0mL待测酶液,40℃平衡20min。 吸取2.00mL平衡后待测酶液,加入到25mL刻度试管中,再加入5.0mLDNS试剂,混匀,然后 加入2.0mL平衡后的蔗果三糖溶液,40℃平衡30min,沸水浴加热5min,冷却至室温,加水定容至 25mL,加塞后颠倒混匀,放置30min,以标准空白液为对照调零,在540nm处测定吸光度值AB。 吸取2.0mL平衡后的待测酶液,加入到25mL刻度试管中,加入2.0mL平衡后的蔗果三糖溶液, 混匀40℃平衡30min,然后再加入5.0mLDNS试剂,混匀以终止反应,沸水浴加热5min,冷却至室 温,用水定容至25mL,加塞后颠倒混匀,放置30min,以标准空白液为对照调零,在540nm处测定吸光度值AE。 A.2.1 原理 在pH4.0,温度40℃,底物(牡蛎糖,oysterglycogen)浓度为10mg/mL的标准条件下,1min释 放出1μmol还原糖当量(以葡萄糖计)所需要的酶量为1U。 A.2.2 试剂和溶剂 A.2.2.1 乙酸盐缓冲液(pH 为4.0):称取54.4g三水和乙酸钠(CH3COONa·3H2O),溶于水,加 92mL乙酸(冰醋酸),稀释至1000mL。 A.2.2.2 氢氧化钠溶液(2mol/L):准确称取80g氢氧化钠,用水溶解并稀释至1000mL。 A.2.2.3 3,5-二硝基水杨酸试剂(DNS):将6.3g3,5-二硝基水杨酸试剂和262mL氢氧化钠溶液,加 到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g苯酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸 馏水定容至1000mL,贮于棕色瓶中备用。 A.2.2.4 葡萄糖标准液(1mg/mL):称取无水葡萄糖100mg,加乙酸盐缓冲液溶解,定容至100mL。 A.2.2.5 牡蛎糖溶液(10mg/mL):精确称取1.0g牡蛎糖,用乙酸盐缓冲液溶解并稀释至100mL。 A.2.3 仪器 A.2.3.1 分析天平。 A.2.3.2 电热恒温水浴锅。 A.2.3.3 分光光度计。 A.2.3.4 计时器。 A.2.4 分析步骤 A.2.4.1 葡萄糖标准曲线的绘制 吸取乙酸盐缓冲液4.0mL至25mL刻度试管中,加入DNS试剂5.0mL,沸水浴加入5min,冷却 至室温,用水定容至25mL,制成标准空白样。 分别吸取葡萄糖标准液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL、7.00mL于 100mL容量瓶中,用乙酸盐缓冲液定容至100mL,配制成浓度0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.30mg/mL、 0.40mg/mL、0.50mg/mL、0.60mg/mL、0.70mg/mL葡萄糖标准使用液,吸取葡萄糖标准使用液各 2.0mL,分别加入到25mL刻度试管中,再分别加入2.0mL乙酸盐缓冲液和5.0mLDNS试剂。将各 管摇匀,在沸水浴中准确加热5min,取出,冷却至室温,加水定容至25mL,加塞后颠倒混匀,放置 30min,以标准空白液为对照调零,在540nm处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标,葡萄糖含量(mg)为横坐标,绘制标准曲线。 A.2.4.2 待测酶溶液的配制 称取测试酶样品,用乙酸盐缓冲液进行稀释、定容(稀释后的酶液中果聚糖酶活力在0.04U/mL~0.08U/mL之间)。 A.2.4.3 测定步骤 吸取10.0mL牡蛎糖溶液,40℃平衡20min。 吸取10.0mL待测酶液,40℃平衡20min。 吸取2.0mL平衡后待测酶液,加入到25mL刻度试管中,再加入5.0mLDNS试剂,混匀,然后加 入2.0mL平衡后的牡蛎糖溶液,40℃平衡30min,沸水浴加热5min,冷却至室温,加水定容至25mL, 加塞后颠倒混匀,放置30min,以标准空白液为对照调零,在540nm处测定吸光度值AB。 吸取2.0mL平衡后的待测酶液,加入到25mL刻度试管中,加入2.0mL平衡后的牡蛎糖溶液,混 匀40℃平衡30min,然后再加入5.0mLDNS试剂,混匀以终止反应,沸水浴加热5min,冷却至室温, 加水定容至25mL,加塞后颠倒混匀,放置30min,以标准空白液为对照调零,在540nm处测定吸光度值AE。 A.3 淀粉葡糖苷酶酶活力测定方法 A.3.1 以可溶性淀粉为底物的酶活力 以可溶性淀粉为底物的酶活力测定参照GB 1886.174-2016《食品安全国家标准 食品添加剂 食品工业用酶制剂》附录A.2α-淀粉酶活力的测定。 A.3.2 以对硝基酚-β-麦芽糖苷为底物的酶活力 A.3.2.1 原理 在pH4.5,温度为40℃,底物(对硝基酚-β-麦芽糖苷)浓度为10mmol/L,有过量β-葡糖苷酶存在 的标准条件下,每分钟从对硝基酚-β-麦芽糖苷释放出1μmol对硝基酚(p-NP)所需要的酶量为1U。 A.3.2.2 试剂和溶剂 A.3.2.2.1 乙酸(0.2mol/L):准确吸取12mL冰乙酸,用水稀释至1000mL。 A.3.2.2.2 乙酸钠溶液(0.2mol/L):准确称取27.2g三水合乙酸钠,用水溶解并稀释至1000mL。 A.3.2.2.3 乙酸盐缓冲液(pH 为4.5):将280mL乙酸溶液(0.2mol/L)与220mL乙酸钠溶液 (0.2mol/L)混合,用水稀释至1000mL。 A.3.2.2.4 碳酸钠溶液(1mol/L):准确称取105.9g碳酸钠,用水溶解并稀释至1000mL。 A.3.2.2.5 对硝基酚标准液(1mg/mL):称取对硝基酚100mg,加乙酸盐缓冲液溶解,定容至100mL。 A.3.2.2.6 β-葡糖苷酶溶液:用乙酸盐缓冲液进行稀释、定容(稀释后的酶液中β-葡糖苷酶活力在2U/mL~4U/mL之间)。 A.3.2.2.7 对硝基酚-β-麦芽糖苷溶液(10mmol/mL):准确称取4.63g对硝基酚-β-麦芽糖苷,用β-葡 糖苷酶溶液溶解并稀释至1000mL。 A.3.2.3 仪器 A.3.2.3.1 分析天平。 A.3.2.3.2 电热恒温水浴锅。 A.3.2.3.3 分光光度计。 A.3.2.3.4 计时器。 A.3.2.4 分析步骤 A.3.2.4.1 对硝基苯标准曲线的绘制 吸取乙酸盐缓冲液2.0mL,加入1.0mL碳酸钠溶液,混匀,制成标准空白样。 分别吸取对硝基酚标准液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL、7.00mL,分别 用乙酸盐缓冲液定容至100mL,配制成浓度0.10mg/mL、0.2......