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| 标准编号 | HJ 897-2017 (HJ897-2017) | | 中文名称 | 水质 叶绿素a的测定 分光光度法 | | 英文名称 | Water quality. Determination of chlorophyll a. Spectrophotometric method | | 行业 | 环保行业标准 | | 中标分类 | Z16 | | 国际标准分类 | 13.060 | | 字数估计 | 8,816 | | 发布日期 | 2017-12-21 | | 实施日期 | 2018-02-01 | | 引用标准 | GB/T 14581; HJ 494; HJ/T 91 | | 标准依据 | 环境保护部公告2017年第77号 | | 发布机构 | 生态环境部 | | 范围 | 本标准规定了测定水中叶绿素a的分光光度法。本标准适用于地表水中叶绿素a的测定。本标准测定丙酮提取液中叶绿素a的检出限为0.04 mg/L。当取样体积为200 ml，丙酮提取液体积为10 ml时，本方法的检出限为2 μg/L，测定下限为8μg/L。 | HJ 897-2017: 水质 叶绿素a的测定 分光光度法
HJ 897-2017 英文名称: Water quality. Determination of chlorophyll a. Spectrophotometric method
中华人民共和国国家环境保护标准
水质 叶绿素 a 的测定 分光光度法
1 适用范围
本标准规定了测定水中叶绿素 a的分光光度法。
本标准适用于地表水中叶绿素 a的测定。
本标准测定丙酮提取液中叶绿素 a的检出限为 0.04 mg/L。当取样体积为 200 ml，丙酮
提取液体积为 10 ml时，本方法的检出限为 2 μg/L，测定下限为 8 μg/L。
2 规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导
HJ 494 水质 采样技术指导
HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范
3 方法原理
将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心
分离后分别于 750 nm、664 nm、647 nm和 630 nm波长处测定提取液吸光度，根据公式计
算水中叶绿素 a的浓度。
4 试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。
4.1 丙酮（CH3COCH3）。
4.2 碳酸镁（MgCO3）。
4.3 丙酮溶液：9+1。
在 900 ml丙酮（4.1）中加入 100 ml实验用水。
4.4 碳酸镁悬浊液。
称取 1.0 g碳酸镁（4.2），加入 100 ml实验用水，搅拌成悬浊液（使用前充分摇匀）。
4.5 玻璃纤维滤膜：直径 47 mm，孔径为 0.45 μm～0.7 μm。
25 仪器和设备
5.1 采样瓶：1 L或 500 ml具磨口塞的棕色玻璃瓶。
5.2 过滤装置：配真空泵和玻璃砂芯过滤装置。
5.3 研磨装置：玻璃研钵或其他组织研磨器。
5.4 离心机：相对离心力可达到 1000×g（转速 3000 r/min～4000 r/min）。
5.5 玻璃刻度离心管：15 ml，旋盖材质不与丙酮反应。
5.6 可见分光光度计：配 10 mm石英比色皿。
5.7 针式滤器：0.45 μm聚四氟乙烯有机相针式滤器。
5.8 一般实验室常用仪器和设备。
6 样品
6.1 样品采集
按照 GB/T 14581、HJ/T 91和 HJ 494中的相关规定进行样品的采集。样品的采集一般
使用有机玻璃采水器或其他适当的采样器采集水面下 0.5 m样品，湖泊、水库根据需要可进
行分层采样或混合采样，采样体积为 1 L或 500 ml。如果样品中含沉降性固体（如泥沙等），
应将样品摇匀后倒入 2 L量筒，避光静置 30 min，取水面下 5 cm样品，转移至采样瓶（5.1）。
在每升样品中加入 1 ml碳酸镁悬浊液（4.4），以防止酸化引起色素溶解。
注：如果水深不足 0.5 m，在水深 1/2处采集样品，但不得混入水面漂浮物。
6.2 样品保存
样品采集后应在 0 ℃～4 ℃避光保存、运输，24 h内运送至检测实验室过滤（若样品
24 h内不能送达检测实验室，应现场过滤，滤膜避光冷冻运输），样品滤膜于-20 ℃避光保
存，14 d内分析完毕。
注：样品采集后，如条件允许，宜尽快分析完毕。
6.3 试样的制备
6.3.1 过滤
在过滤装置（5.2）上装好玻璃纤维滤膜（4.5）。根据水体的营养状态确定取样体积，见
表 1，用量筒量取一定体积的混匀样品，进行过滤，最后用少量蒸馏水冲洗滤器壁。过滤时
负压不超过 50 kPa，在样品刚刚完全通过滤膜时结束抽滤，用镊子将滤膜取出，将有样品的
一面对折，用滤纸吸干滤膜水分。
注：仅当富营养化水体的样品无法通过玻璃纤维滤膜时，可采用离心法浓缩样品，但转移过程中应保
证提取效率，避免叶绿素 a的损失及水分对丙酮溶液浓度的影响。
6.3.2 研磨
将样品滤膜放置于研磨装置（5.3）中，加入 3 ml～4 ml丙酮溶液（4.3），研磨至糊状。
补加 3 ml～4 ml丙酮溶液（4.3），继续研磨，并重复 1～2次，保证充分研磨 5 min以上。
将完全破碎后的细胞提取液转移至玻璃刻度离心管（5.5）中，用丙酮溶液（4.3）冲洗研钵
及研磨杵，一并转入离心管中，定容至 10 ml。
注：叶绿素对光及酸性物质敏感，实验室光线应尽量微弱，能进行分析操作即可，
所有器皿不能用酸浸泡或洗涤。
6.3.3 浸泡提取
将离心管中的研磨提取液充分振荡混匀后，用铝箔包好，放置于 4 ℃避光浸泡提取 2 h
以上，不超过 24 h。在浸泡过程中要颠倒摇匀 2～3次。
6.3.4 离心
将离心管放入离心机（5.4），以相对离心力 1000×g（转速 3000 r/min～4000 r/min）离
心 10 min。然后用针式滤器（5.7）过滤上清液得到叶绿素 a的丙酮提取液（试样）待测。
6.4 空白试样的制备
用实验用水按照与试样的制备（6.3）相同的步骤进行实验室空白试样的制备。
7 分析步骤
7.1 试样测定
将试样移至比色皿中，以丙酮溶液（4.3）为参比溶液，于波长 750 nm、664 nm、647 nm、
630 nm处测量吸光度。
750 nm波长处的吸光度应小于 0.005，否则需重新用针式滤器（5.7）过滤后测定。
7.2 空白试验
按照与试样测定（7.1）相同的步骤进行实验室空白试样（6.4）的测定。
48 结果计算与表示
8.1 结果计算
8.2 结果表示
当测定结果小于 100 μg/L时，保留至整数位；当测定结果大于等
于 100 μg/L时，保留三位有效数字。
9 精密度和准确度
9.1 精密度
六家实验室对叶绿素 a浓度为 5 μg/L、11 μg/L、25 μg/L的统一地表水样品进行了 6次
重复测定，实验室内相对标准偏差分别为：5.6%～11%，3.1%～6.0%，1.8%～5.0%；实验
室间相对标准偏差分别为：5.2%，8.9%，5.9%；重复性限为：2 μg/L，2 μg/L，3 μg/L。再
现性限为：2 μg/L，4 μg/L，5 μg/L。
9.2 准确度
六家实验室对含叶绿素 a浓度为 11 μg/L、25 μg/L的统一地表水样品进行叶绿素 a纯品
溶液加标测定，加标量为9 μg/L、28 μg/L，加标回收率范围为83.6%～95.9%和79.9%～92.0%，
加标回收率最终值为 89.2%±10.8%；86.3......
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