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| 标准编号 | SN/T 5212-2020 (SN/T5212-2020) | | 中文名称 | 水松鉴定方法 | | 英文名称 | (Water pine identification method) | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 16,196 | | 发布日期 | 2020-12-30 | | 实施日期 | 2021-07-01 | | 标准依据 | 海关总署公告2020年第136号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 5212-2020
Identification of Glyptostrobus pensilis （Staunton ex D.Don) K.Koch
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
水松鉴定方法
2020-12-30 发布
2021-07-01 实施
中华人民共和国海关总署 发 布
前言
本文件按照 GB/T 1.1-2020 给出的规则起草。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国福州海关、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国青岛
海关。
本文件主要起草人：于文涛、陈乃中、邵秀玲、虞赟、李明福、李佳、宋涛。
水松鉴定方法
1 范围
本文件规定了水松的鉴定方法。
本文件适用于水松的鉴定。
2 规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3 术语、定义和缩略语
3.1 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1.1
种鳞 seminiferous scale
裸子植物大孢子叶球由大孢子叶构成，呈螺旋状排列在纵轴上，上面较大而顶部肥厚的部分叫
种鳞，也叫珠鳞或果鳞。一般认为珠鳞由大孢子叶发育而来。
3.1.2
苞鳞 bract scale
裸子植物大孢子叶球由大孢子叶构成，呈螺旋状排列在纵轴上，下面较小的薄片是苞鳞，一般
认为苞鳞是失去生殖能力的大孢子叶。
3.1.3
顶芽 terminal bud
在茎轴顶端形成的芽之总称，当幼胚进行极性分化时，最初形成的是顶芽，顶芽是最活跃的生
长点之一。
3.1.4
腋芽 axillary bud
侧芽之一种，特指从叶腋所生出的定芽。
3.2 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
4 水松基本信息
中文名：水松
水松其他信息参见附录 A。
5 方法原理
水松可能以球果、种子、植株残体、植物标本和幼苗等形式进出境。水松球果、种子和叶等形态
特征及标准 DNA 条码是鉴定该种的主要依据。其中球果、种子和叶片等形态特征均完整时，以形态
特征作为鉴定依据；种子或叶片等形态特征不完整的植物组织，以形态特征作为参考，以分子特征作
为鉴定的主要依据。
由于水松属为单型属，鉴定为水松属即为鉴定为水松。
6 设备和试剂
6.1 设备及器具
体视显微镜、电子天平、放大镜、解剖刀、解剖针、镊子、指形管、培养皿、白瓷盘、棉花、
样品袋、标本夹、标签、记录纸、标本瓶、标本盒、常规 PCR 仪、微量分光光度仪、电泳仪、凝胶
成像系统、高速冷冻离心机、生物安全柜、烘箱、高压灭菌锅、研钵、摇床、水浴锅、制冰机、纯
水仪、旋涡振荡器、冰箱、冷冻混合研磨仪、微量移液器（2 μL，10 μL，20 μL，100 μL，200 μL，
1000 μL）、离心管（2 mL）、PCR 反应管（0.2 mL，0.5 mL）。
6.2 试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。
植物基因组提取试剂盒、超纯水、DNA Marker、琼脂糖、核酸凝胶染料、液氮、脱氧核糖核苷
三磷酸（dNTPs）、Taq 聚合酶、10×PCR 缓冲液、防虫剂、樟脑精、干燥剂。采用改良 CTAB 法提取
试剂（参见附录 B）。
7 实验室检测
选择现场检疫截获的原始样品的一部分为待检样品，该样品数量（株数或质量）的 1/2 至 3/4（较
少样品时）作为检验样品，剩余样品作为保存样品。送检样品不足 3 株或 1.0 kg 的全检。
8 鉴定方法
8.1 形态学鉴定方法
依据杉科和水松的形态特征、水松属及其近缘属分属检索表（见附录 C）、基于种子和果实形态
特征的水松及其近似属种检索表（见附录 D）对疑似样品进行物种鉴定。
8.1.1 杉科形态特征
8.1.1.1 茎
常绿或落叶乔木，树干端直，大枝轮生或近轮生。
8.1.1.2 叶
叶螺旋状排列，散生，很少交叉对生（水杉属），披针形、钻形、鳞状或条形，同一树上之叶同
型或二型。
8.1.1.3 球花
球花单性，雌雄同株，球花的雄蕊和珠鳞均螺旋状着生，很少交叉对生（水杉属）；雄球花小，
单生或-簇生枝顶，或排成圆锥花序状，或生叶腋，雄蕊有（2~9 个）（常 3~4 个）花药，花粉无
气囊；雌球花顶生或生于去年生枝近枝顶，珠鳞与苞鳞半合生（仅顶端分离）或完全合生，或珠鳞
甚小（杉木属），或苞鳞退化（台湾杉属），珠鳞的腹面基部有 2 枚 ~9 枚直立或倒生胚珠。
8.1.1.4 球果
球果当年成熟，熟时张开，种鳞（或苞鳞）扁平或盾形，木质或革质，螺旋状着生或交叉对生
（水杉属），宿存或熟后逐渐脱落，能育种鳞（或苞鳞）的腹面有 2 粒 ~ 9 粒种子。
8.1.1.5 种子
种子扁平或三棱形，周围或两侧有窄翅，或下部具长翅；胚有子叶 2 枚 ~ 9 枚。
8.1.2 水松形态特征（参见附录 E）
8.1.2.1 全株及茎
乔木，高 8 m~10 m，稀高达 25 m。生于湿生环境者，树干基部膨大成柱槽状，并且有伸出土面
或水面的吸收根，柱槽高达 70 cm，干基直径达 60 cm~120 cm，树干有扭纹；树皮褐色或灰白色而带
褐色，纵裂成不规则的长条片；枝条稀疏，大枝近平展，上部枝条斜伸；短枝从二年生枝的顶芽或多
年生枝的腋芽伸出，长 8 cm~18 cm，冬季脱落；主枝则从多年生及二年生的顶芽伸出，冬季不脱落。
8.1.2.2 叶
叶多型：鳞形叶较厚或背腹隆起，螺旋状着生于多年生或当年生的主枝上，长约 2 mm，有白色
气孔点，冬季不脱落；条形叶两侧扁平，薄，常列成二列，先端尖，基部渐窄，长 1 cm~3 cm，宽
1.5 mm~4 mm，淡绿色，背面中脉两侧有气孔带；条状钻形叶两侧扁，背腹窿起，先端渐尖或尖钝，
微向外弯，长 4 mm~11 mm，辐射伸展或呈三列状；条形叶及条状钻形叶均于冬季连同侧生短枝一同
脱落。
8.1.2.3 球果
球果倒卵圆形，长 2 cm~2.5 cm，径 1.3 cm~1.5 cm；种鳞木质，扁平，中部的倒卵形，基部楔形，
先端圆，鳞背近边缘处有 6 个~10 个微向外反的三角状尖齿；苞鳞与种鳞几全部合生，仅先端分离，
三角状，向外反曲，位于种鳞背面的中部或中上部。
8.1.2.4 种子
种子椭圆形，稍扁，褐色，长 5 mm~7 mm，宽 3 mm~4 mm，下端有长翅，翅长 4 mm~7 mm。
8.1.2.5 幼苗
子叶 4 枚 ~5 枚，条状针形，长 1.2 cm~1.6 cm，宽不及 1 mm，无气孔线；初生叶条形，长约 2 cm，
宽 1.5 mm，轮生、对生或互生，主茎有白色小点。
8.2 分子生物学鉴定方法
8.2.1 样品的处理
将需要提取 DNA 的水松植物材料（种子为 1 粒 ~2 粒，新鲜叶为 100 mg，硅胶干燥的叶为 10 mg），
放入 2 mL 的 EP 管中，每个管内加 2 粒钢珠，加液氮后使用冷冻混合研磨仪研磨 3 min（30 次/s）。
8.2.2 核酸的制备
采用商品化的植物基因组提取试剂盒或采用改良的 CTAB 法提取植物基因组总 DNA。改良的
CTAB 法参见附录 B。
PCR 级 DNA 溶液的 OD260/OD280 比值应为 1.7~1.9。
8.2.3 DNA 条形码片段扩增
利用 rbcL 基因的通用引物进行 rbcL 基因扩增，引物序列、PCR 反应程序和 PCR 反应体系见附录 F。
8.2.4 PCR 产物的检测
取 PCR 产物 5 μL，1.5% 琼脂糖凝胶电泳，核酸凝胶染料染色，在凝胶成像系统观察、拍照。
rbcL 引物扩增可获得约 991 bp 的扩增片段。
8.2.5 测序与序列处理
取剩余的 PCR 扩增产物 45 μL，经 1.5% 琼脂糖凝胶电泳分离，目的片段使用 DNA 产物纯化试剂
盒纯化并测序。测序引物与 PCR 扩增引物相同。
测序结果利用序列拼接软件进行拼接编辑，对比峰图，判断序列方向，去除测序引物序列，两
端测序质量 Q 值小于 20 的序列去除。
8.2.6 标准 DNA 条码
水松 rbcL 基因序列 GenBank 登录号：MF893589、MF893590。
9 结果判定
9.1 形态学结果判定
以水松球果、种子和叶等形态特征为依据，符合第 8 章所描述的形态鉴定特征并符合水松属及
其近缘属分属检索表（见附录 C）、基于种子和果实形态特征的水松及其近似属种检索表（见附录 D）
中水松特征的，......
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