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| 标准编号 | SN/T 5214-2020 (SN/T5214-2020) | | 中文名称 | 伯乐树鉴定方法 | | 英文名称 | (Bole tree identification method) | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 16,121 | | 发布日期 | 2020-12-30 | | 实施日期 | 2021-07-01 | | 标准依据 | 海关总署公告2020年第136号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 5214-2020: 伯乐树鉴定方法
SN/T 5214-2020 英文名称: (Bole tree identification method)
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
伯乐树鉴定方法
中华人民共和国海关总署 发 布
前言
本文件按照 GB/T 1.1-2020 给出的规则起草。
本文件中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位：中华人民共和国福州海关、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国大连
海关。
本文件主要起草人：于文涛、陈乃中、崔博采、李敏、李明福、王有福、虞赟、许瑾、李佳。
伯乐树鉴定方法
1 范围
本文件规定了伯乐树的鉴定方法。
本文件适用于伯乐树的鉴定。
2 规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
4 基本信息
伯乐树的基本信息如下：
中文名：伯乐树，钟萼木，冬桃，钟古树
学名：Bretschneidera sinensis Hemsl.
异名：Bretschneidera yunshanensis Chun & F.C.How
英文名：Boleshu
分类地位：隶属伯乐树科 Bretschneideraceae、伯乐树属 Bretschneidera Hemsl.。伯乐树为单型科，
即伯乐树科内仅伯乐树属一属，伯乐树属内仅伯乐树一种。
伯乐树其他信息参见附录 A。
5 方法原理
伯乐树可能以果实、种子、植株残体、植物标本和幼苗等形式进出境。伯乐树种子、叶等形态特
征及标准 DNA 条码是鉴定该种的主要依据。其中种子和叶片等形态特征均完整时以形态特征作为鉴
定依据，种子或叶片等形态特征不完整时以分子特征作为鉴定的主要依据。
由于伯乐树科为单型科，鉴定为伯乐树科即为鉴定为伯乐树。
6 设备和试剂
6.1 设备及器具
体视显微镜、电子天平、放大镜、解剖刀、解剖针、镊子、指形管、培养皿、白瓷盘、棉花、
样品袋、标本夹、标签、记录纸、标本瓶、标本盒、常规 PCR 仪、微量分光光度仪、电泳仪、凝胶
成像系统、高速冷冻离心机、生物安全柜、烘箱、高压灭菌锅、研钵、摇床、水浴锅、制冰机、纯
水仪、旋涡振荡器、冰箱、冷冻混合研磨仪、微量移液器（2 μL，10 μL，20 μL，100 μL，200 μL，
1000 μL）、离心管（2 mL）、PCR 反应管（0.2 mL，0.5 mL）。
6.2 试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。
植物基因组提取试剂盒、超纯水、DNA Marker、琼脂糖、核酸凝胶染料、液氮、脱氧核糖核苷三磷
酸（dNTP）、Taq 聚合酶、10×PCR 缓冲液、防虫剂、樟脑精、干燥剂、CTAB 法提取试剂（参见附录 B）。
7 实验室检测
选择现场检疫截获的原始样品的一部分为待检样品，该样品数量（株数或重量）的 1/2 至 3/4（较
少样品时）作为检验样品，剩余样品作为保存样品。送检样品不足 3 株或 1.0 kg 的全检。
8 鉴定方法
8.1 形态学鉴定方法
依据伯乐树的形态特征、基于种子形态特征的伯乐树及近似属种鉴定检索表（参见附录 C）和叶
片形态特征的伯乐树及近似种分种检索表（参见附录 D 和附录 E）对疑似样品进行物种鉴定。
8.1.1 伯乐树科形态学特征
8.1.1.1 叶
叶互生，奇数羽状复叶；小叶对生或下部的互生，有小叶柄，全缘，羽状脉；无托叶。
8.1.1.2 花
花大，两性，两侧对称，组成顶生、直立的总状花序；花萼阔钟状，5 浅裂；花瓣 5 片，分离，
覆瓦状排列，不相等，后面的 2 片较小，着生在花萼上部；雄蕊 8 枚，基部连合，着生在花萼下部，
较花瓣略短，花丝丝状，花药背着；雌蕊 1 枚，子房无柄，上位，3 室 ~ 5 室，中轴胎座，每室有悬
垂的胚珠 2 颗，花柱较雄蕊稍长，柱头头状，小。
8.1.1.3 果实及种子
果为蒴果，3 瓣裂 ~5 瓣裂，果瓣厚，木质；种子大。
8.1.2 伯乐树形态特征（参见附录 F）
8.1.2.1 全株及茎
乔木，高 10 m~20 m，树皮灰褐色；小枝有较明显的皮孔。
8.1.2.2 叶
奇数羽状复叶通常长 25 cm~45 cm，总轴有疏短柔毛或无毛；叶柄长 10 cm~18 cm，小叶 7 片 ~15
片，纸质或革质，狭椭圆形，菱状长圆形，长圆状披针形或卵状披针形，多少偏斜，长 6 cm~26 cm，
宽 3 cm~9 cm，全缘，顶端渐尖或急短渐尖，基部钝圆或短尖、楔形，叶面绿色，无毛，叶背粉绿色
或灰白色，有短柔毛，常在中脉和侧脉两侧较密；叶脉在叶背明显，侧脉 8 对 ~15 对；小叶柄长
2 mm~10 mm，无毛。
8.1.2.3 花序
总状花序长 20 cm~36 cm ；总花梗、花梗、花萼外面有棕色短绒毛；花淡红色，直径约 4 cm，
花梗长 2 cm~3 cm ；花萼直径约 2 cm，长 1.2 cm~1.7 cm，顶端具短的 5 齿，内面有疏柔毛或无毛，
花瓣阔匙形或倒卵楔形，顶端浑圆，长 1.8 cm~2 cm，宽 1 cm~1.5 cm，无毛，内面有红色纵条纹；花
丝长 2.5 cm~3 cm，基部有小柔毛；子房有光亮、白色的柔毛，花柱有柔毛。
8.1.2.4 果实
蒴果椭圆球形，近球形或阔卵形，长 3 cm~5.5 cm，直径 2 cm~3.5 cm，被极短的棕褐色毛和常
混生疏白色小柔毛，有或无明显的黄褐色小瘤体，果瓣厚 1.2 mm~5 mm ；果柄长 2.5 cm~3.5 cm，有
或无毛。
8.1.2.5 种子
种子椭圆球形，平滑，成熟时长约 1.8 cm，直径约 1.3 cm。
8.2 分子生物学鉴定方法
8.2.1 样品的处理
将需要提取 DNA 的伯乐树植物材料（新鲜植物组织 100 mg，硅胶干燥的叶为 10 mg），放入
2 mL 的 EP 管中，每个管内加 2 粒钢珠，加液氮后使用冷冻混合研磨仪研磨 3 min（30 次/s）。
8.2.2 核酸的制备
采用商品化的植物基因组提取试剂盒或采用改良的 CTAB 法提取植物基因组总 DNA。改良的
CTAB 法参见附录 B。
PCR 级 DNA 溶液的 OD260/OD280 比值应为 1.7~1.9。
8.2.3 DNA 条形码片段扩增
利用 rbcL 基因的通用引物进行 rbcL 基因扩增，引物序列、PCR 反应程序和 PCR 反应体系参见附
录 G。
8.2.4 PCR 产物的检测
取 PCR 产物 5 μL，1.5% 琼脂糖凝胶电泳，核酸凝胶染料染色，在凝胶成像系统观察、拍照。
rbcL 引物扩增可获得约 991 bp 的扩增片段。
8.2.5 测序与序列处理
取剩余的 PCR 扩增产物 45 μL，经 1.5% 琼脂糖凝胶电泳分离，目的片段使用 DNA 产物纯化试剂
盒纯化并测序。测序引物与 PCR 扩增引物相同。
测序结果利用序列拼接软件进行拼接编辑，对比峰图，判断序列方向，去除测序引物序列，两
端测序质量 Q 值小于 20 的序列去除。
8.2.6 标准 DNA 条码
伯乐树 rbcL 基因序列 GenBank 登录号：MG792130。
9 结果判定
9.1 形态学结果判定
以果实、种子、叶的形态特征为依据，符合第 8 章所描述的形态鉴定特征并符合基于种子形态特
征的伯乐树及近似属种鉴定检索表（参见附录 C）和基于叶片形态特征的伯乐树及近似种分种检索表
（参见附录 D）中伯乐树特征的，可鉴定为伯乐树。
9.2 分子生物学结果判定
查看序列相似性最高（Max ident or Similarity ）的物种，一般为与查询序列最接近的物种。当序列鉴
定率最高物种为 Bretschneidera yunshanensis 时，可作为鉴定为伯乐树的依据。
10 标本和样品的保存与处理
10.1 保存方法
10.1.1 标本......
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